肌醇六磷酸对裸鼠皮下SKOV3细胞移植瘤的抑制作用及其机制研究

发布时间：2017-07-16 13:19

  本文关键词：肌醇六磷酸对裸鼠皮下SKOV3细胞移植瘤的抑制作用及其机制研究

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【摘要】：目的:研究肌醇六磷酸(inositol hexaphosphoric acid,IP6)对裸鼠皮下SKOV3细胞移植瘤的生长、增殖抑制作用及其可能的机制。方法:1 细胞培养:将SKOV3细胞系置于含10%新生牛血清的RPMI-1640培养基中,在37℃、5%CO_2的饱和湿度培养箱中常规培养。2 裸鼠皮下SKOV3细胞移植瘤模型的建立与实验分组:将对数生长期的SKOV3细胞接种于裸鼠的背侧近前肢处的皮下,于种瘤第5天选择生长出移植瘤且直径在3~5mm的裸鼠入组实验,裸鼠随机分为对照组、IP6低剂量组、IP6高剂量组、顺铂组及IP6低剂量+顺铂联合组,每组6只裸鼠。3 实验药物的制备:IP6和肌醇的混合物溶于0.9%氯化钠注射液中,配成含IP6为3mg/ml、6mg/ml的溶液;顺铂溶于0.9%氯化钠注射液中,配成0.3mg/ml的溶液,均现配现用。4 给药方法:对照组按0.1ml/g 0.9%氯化钠注射液每天灌胃一次,连续灌胃28天,前7天同时腹腔注射相同体积0.9%氯化钠注射液。IP6低剂量组按每天含IP6为300mg/kg灌胃一次,连续灌胃28天。IP6高剂量组按每天含IP6为600mg/kg灌胃一次,连续灌胃28天。顺铂组以每天3mg/kg腹腔注射一次,连续注射7天。联合组按每天含IP6为300mg/kg灌胃一次,连续灌胃28天,前7天同时腹腔注射3mg/kg顺铂溶液。5 裸鼠一般情况、移植瘤体积、重量及抑瘤率:每天观察裸鼠精神、饮食、活动及二便情况。用药第1、7、14、21、28天测量裸鼠体重和移植瘤的最长直径(a)和最短直径(b),按公式V(mm~3)=ab~2/2计算移植瘤体积。停药24小时终止观察,处死裸鼠,剥取瘤组织并称重。按公式抑瘤率IR(%)=(对照组瘤重量-实验组瘤重量)/对照组瘤重量×100%计算抑瘤率。6 免疫组织化学法检测肿瘤组织中cyclinD1蛋白的表达。7 Real Time-PCR法检测肿瘤组织中miRNA let-7的表达。8 统计学方法:采用SPSS20.0统计学软件对实验数据进行处理及分析,计量资料用x±s描述,资料满足正态分布且方差齐性时,采用单因素方差分析,差异具有统计学意义时,均数间的两两比较采用SNK-q检验。不满足正态分布或/和方差齐性的计量资料采用秩转换的Kruskal-Wallis H检验,以P0.05为差异有统计学意义。结果:1 给药过程顺利,用药两周后部分裸鼠出现精神萎靡,行动迟缓,饮食量下降,大便虽成型但湿润度增加的情况,含IP6实验组较顺铂组裸鼠的一般状况好。随着周龄及用药时间的增加,各组裸鼠重量较前增加,用药结束24h后测量各组裸鼠重量,用x±s表示:对照组22.27±2.34g,低剂量组22.42±1.73g,高剂量组22.36±1.67g,顺铂组20.15±0.66g,联合组22.00±1.47g,各组裸鼠移植瘤的重量差异有统计学意义(P0.05)。用药期间,每周测量各组裸鼠移植瘤体积,各组裸鼠移植瘤体积较前增长,用药结束24h后的移植瘤体积:联合组顺铂组高剂量组低剂量组对照组,各组移植瘤体积差异有统计学意义(P0.05)。用药结束24h后测量各组裸鼠移植瘤重量,用x±s表示:对照组3.38±0.017g,低剂量组3.11±0.018g,高剂量组2.83±0.017g,顺铂组2.80±0.040g,联合组2.63±0.033g,各组裸鼠移植瘤的重量差异有统计学意义(P0.05)。抑瘤率:联合组顺铂组高剂量组低剂量组。2 裸鼠移植瘤组织中cyclinD1蛋白的表达情况:所有分组中均有cyclinD1蛋白的表达,在对照组中高表达,实验组中低表达,表达量的排列顺序为联合组顺铂组高剂量组低剂量组对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。3 裸鼠移植瘤组织中miRNA let-7的表达情况:所有分组中均有miRNA let-7表达,在对照组中低表达,实验组中高表达,表达量的排列顺序为联合组顺铂组高剂量组低剂量组对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:1 与对照组相比,实验组可以抑制移植瘤的生长。同时发现,与单用顺铂相比,IP6与顺铂联用可以更有效地抑制移植瘤生长,同时降低顺铂引起的副反应。2 IP6可能通过抑制cyclinD1蛋白表达,阻止肿瘤细胞周期中的G1/S期转换,抑制肿瘤细胞增殖从而发挥抗肿瘤作用。3 IP6可能通过增加miRNA let-7含量而发挥抑制肿瘤的作用。
【关键词】：卵巢癌 SKOV3细胞系 IP6 cyclinD1蛋白 miRNA let-7
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.31
【目录】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 英文缩写10-11
• 前言11-12
• 材料与方法12-18
• 结果18-20
• 附图20-24
• 附表24-29
• 讨论29-33
• 结论33-34
• 参考文献34-37
• 综述 肌醇六磷酸对多种肿瘤抑制作用的研究进展37-47
• 参考文献42-47
• 致谢47-48
• 个人简历48

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 王志敏;许天敏;崔松花;崔满华;;CyclinD1表达与中国妇女子宫内膜癌关系的Meta分析[J];中国妇幼保健;2015年13期

2 郝红英;刘建伟;周彩荣;叶文见;;超声波辅助提取米糠中植酸钙镁的工艺条件优化[J];江苏农业科学;2013年03期

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本文编号：548861