靶向调控EMS1基因miRNAs分子的鉴定及其功能的初步研究

发布时间：2017-07-17 14:14

  本文关键词：靶向调控EMS1基因miRNAs分子的鉴定及其功能的初步研究

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【摘要】：目的:EMS1基因是一种癌基因,首先从乳腺癌和头颈部鳞癌中被克隆出来而被人们所认知。本课题组前期发现EMS1基因为胃癌相关基因,在胃癌中高表达,与转移密切相关。有研究表明,EMS1基因在肿瘤的发生、发展过程中受多个miRNA的调控。本实验通过生物信息学技术及体外细胞实验从转录后水平筛选鉴定出靶向调控人EMS1基因的miRNAs分子,阐明EMS1基因在胃癌中表达上调的分子机制,为胃癌的临床诊断、靶向治疗及判断预后提供理论依据。方法:(1)利用生物信息学软件预测EMS1基因的靶miRNA分子,并通过pubmed、中国知网等网站进行文献检索,筛选出未报道过,可能性较高的miRNAs。(2)选择阳离子脂质体法,将初筛出的靶miRNA mimic/inhibitor瞬时转染至胃癌细胞MGC803中,再采用Western blot技术检测转染48h后空白组、miRNA mimic/inhibitor NC对照组及miRNA mimic/inhibitor实验组EMS1蛋白的表达变化。(3)利用MTT实验、划痕实验和体外迁移侵袭实验,检测瞬时转染miR-545-3p mimic/inhibitor对MGC803细胞增殖、迁移及侵袭等生物学行为的影响。结果:生物信息学结果显示:miR-182、miR-501-3p、miR-338-5p、mir-183、mir-502-3p、mir-545、mir-329、mir-603、mir-326、mir-526a、mir-548d-3p等11个mirna可能是ems1基因的靶mirna。文献检索结果显示:在肿瘤组织中表达上调的有mir-182、mir-501-3p、mir-338-5p、mir-183、mir-502-3p等5个mirna;表达下调的有mir-182、mir-545、mir-603、mir-329、mir-326等5个mirna;未见报道的有mir-526a和mir-548d-3p。在5个下调的mirna中mir-326、mir-182是ems1基因的靶mirna已有报道,其余3个mirna与ems1基因的相关性尚未见研究。因此本课题组选出mir-545、mir-329、mir-603可能是ems1基因的靶mirna分子。mirnas与ems13’utr靶结合位点的预测结果显示:mir-545-3p与ems1的结合位点为162-168;mir-329-3p与ems1的结合位点为863-869和1184-1190;mir-603与ems1的结合位点为1042-1048.westernblot实验结果显示:mir-545-3p、mir-329-3p、mir-603三种mirnamimic瞬时转染mgc803细胞后,与空白组和nc组相比mir-545-3p组ems1蛋白的表达下降,p0.05,差异具有统计学意义;mir-329-3p、mir-603组与空白组和nc组相比则ems1蛋白表达无明显差异(p0.05)。将mir-545-3p、mir-329-3p、mir-603三种mirnainhbitor分别瞬时转染mgc803细胞后,与空白组和nc组相比mir-545-3p组ems1蛋白的表达升高(p0.05);mir-329-3p、mir-603组与空白组和nc组相比则ems1蛋白表达变化无明显差异(p0.05)。mtt实验结果显示:与空白组和nc组相比,胃癌mgc803细胞瞬时转染mir-545-3pmimic后,细胞增殖能力减弱(p0.05);相反地,瞬时转染miR-545-3p inhibitor后细胞增殖能力增强(p0.05)。实验表明miR-545-3p高表达可以抑制胃癌细胞MGC803的增殖能力;其被抑制后可使MGC803细胞的增殖能力增强。迁移实验及侵袭实验结果显示:迁移和侵袭实验结果显示MGC803细胞瞬时转染miR-545-3p mimic后,与空白组和mimic NC组相比细胞迁移和能力均减弱(p0.05);MGC803细胞瞬时转染miR-545-3p inhibitor后,与空白组和inhibitor NC组相比细胞迁移和侵袭能力均增强(p0.05)。结论:miR-545-3p为靶向调控EMS1的候选miRNA,可能通过抑制EMS1表达而抑制MGC803细胞的增殖、迁移和侵袭发挥类似抑癌基因的作用。
【关键词】：EMS1 hsa-miR-545-3p 胃癌 侵袭 转移
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 主要中英文缩略语表11-13
• 第1章 绪论13-17
• 第2章 实验材料与方法17-27
• 2.1 实验材料17-20
• 2.2 实验方法20-27
• 第3章 实验结果27-39
• 3.1 生物信息学结果27-28
• 3.2 Western Blot 实验检测 EMS1 蛋白水平28-33
• 3.3 MTT 实验研究 mi R-545-3p 对胃癌细胞 MGC803 增殖的影响33-34
• 3.4 体外细胞迁移实验研究 mi R-545-3p 对 MGC803 迁移的影响34-36
• 3.5 体外细胞侵袭实验研究 mi R-545-3p 对 MGC803 侵袭的影响36-39
• 第4章 讨论39-45
• 第5章 结论45-47
• 参考文献47-53
• 文献综述53-75
• Mi R-182 研究进展53-63
• 参考文献59-63
• EMS1 基因的研究进展63-75
• 参考文献71-75
• 本研究课题资助项目75-77
• 供读硕士学位期间的科研成果77-79
• 致谢79

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本文编号：553969