来那度胺联合克拉霉素的抗骨髓瘤活性及其机制的研究

发布时间：2017-07-18 07:32

  本文关键词：来那度胺联合克拉霉素的抗骨髓瘤活性及其机制的研究

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【摘要】：研究背景及目的意义:多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是好发于老年人的恶性浆细胞疾病,以单克隆浆细胞恶性增殖并分泌大量单克隆免疫球蛋白为主要疾病特征。近年来,蛋白酶体抑制剂和免疫调节剂(Immunomodulatory drugs,IMi Ds)的广泛应用使MM缓解率明显提高。其中,IMi Ds通过作用于MM骨髓微环境发挥直接肿瘤杀伤及免疫调节的双重作用,以第二代免疫调节剂来那度胺为基础联合大环内酯类抗生素克拉霉素、地塞米松的Bi Rd方案在初治及复发难治的MM患者中均表现出较好的疗效。然而克拉霉素联合Rd方案增效作用的机制尚不清楚。本实验旨在探讨来那度胺和克拉霉素联合应用对MM细胞的协同杀伤作用,并对其可能机制进行初步探索,同时研究克拉霉素对来那度胺耐药细胞的杀伤作用。研究方法:用不同浓度的来那度胺、克拉霉素或两药联合处理骨髓瘤细胞系(MM.1S、MM.1R),以DMSO组作为空白对照,应用CCK-8检测MM细胞增殖的影响;流式细胞术检测两种药物单独或联合应用对MM.1S和MM.1R细胞周期、凋亡的影响;蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)检测两种药物单独或联合对MM细胞周期相关蛋白表达的影响;应用上述方法研究两种药物单独或联合对来那度胺耐药细胞系R10R的作用及可能机制。研究结果:1、来那度胺和克拉霉素联用能明显抑制MM.1S、MM.1R细胞增殖,且呈剂量依赖性,并显示协同抗肿瘤作用;2、来那度胺与克拉霉素联合应用可增强对MM.1R细胞G1/S期的阻滞作用;3、来那度胺和克拉霉素联用时明显促进MM.1S、MM.1R细胞凋亡,具有显著的MM细胞杀伤作用;4、来那度胺与克拉霉素联用后MM.1R细胞p21表达增加,CDK6表达降低;5、克拉霉素对来那度胺耐药细胞系R10R呈剂量依赖性的杀伤作用,且与来那度胺联用时与单药应用相比有增强杀伤作用的趋势。结论:来那度胺与克拉霉素对MM.1S、MM.1R的杀伤作用存在协同效应,可能与两药联用后促进细胞周期阻滞、细胞凋亡有关,另外,克拉霉素能够克服来那度胺耐药。因此,我们的研究为来那度胺及其与克拉霉素联合用于骨髓瘤治疗提供更为坚实的实验数据和理论基础。
【关键词】：多发性骨髓瘤 来那度胺 克拉霉素 协同作用
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733.3
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 引言11-13
• 第2章 综述13-23
• 2.1 免疫调节剂14-15
• 2.1.1 免疫调节剂概述14
• 2.1.2 IMiDs的肿瘤杀伤作用14-15
• 2.1.3 IMiDs的免疫调节作用15
• 2.2 克拉霉素15-21
• 2.2.1 克拉霉素的概述15-16
• 2.2.2 克拉霉素对肿瘤的直接杀伤作用16
• 2.2.3 克拉霉素与抗肿瘤药物联用16-18
• 2.2.4 克拉霉素对肿瘤微环境的作用18-19
• 2.2.5 克拉霉素在MM中的应用19-21
• 2.2.6 克拉霉素在其它恶性疾病中的应用21
• 2.3 问题与展望21-23
• 第3章 材料与方法23-32
• 3.1 材料23-25
• 3.1.1 细胞系23
• 3.1.2 主要试剂及耗材23-24
• 3.1.3 主要仪器设备24-25
• 3.2 实验方法25-31
• 3.2.1 细胞培养25
• 3.2.2 Cell Counting kit-8（CCK8）用于细胞活力检测25-26
• 3.2.3 细胞周期检测26-27
• 3.2.4 细胞凋亡检测27
• 3.2.5 Western blot检测27-31
• 3.3 统计学分析31-32
• 第4章 结果32-39
• 4.1 来那度胺和克拉霉素在对人骨髓瘤细胞增殖的抑制作用32-34
• 4.2 来那度胺和克拉霉素在对人骨髓瘤细胞周期、凋亡的作用34-37
• 4.3 来那度胺和克拉霉素对周期相关蛋白的作用37-38
• 4.4 克拉霉素具有克服来那度胺耐药的潜能38-39
• 第5章 讨论39-43
• 第6章 结论43-44
• 参考文献44-54
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果54-55
• 致谢55

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本文编号：556649