基底样型乳腺癌BT549细胞体外干性异质性及其亚群细胞生物学性状研究

发布时间：2017-07-19 04:19

  本文关键词：基底样型乳腺癌BT549细胞体外干性异质性及其亚群细胞生物学性状研究

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【摘要】：肿瘤异质性研究已是近期工作的热点,影响涉及肿瘤的生长速度、侵袭能力、对药物的敏感性、预后等各个方面。乳腺癌组织内细胞的异质性已被实验确认,多数研究指向肿瘤组织微环境和药物干预的压力。本研究通过分析体外培养的人乳腺癌细胞系的干性表型差异,验证肿瘤细胞存在着固有异质性特征这一假设,为我们提出的肿瘤细胞固有异质性是肿瘤组织细胞异质多样性的根源提供实验依据。论文以筛选获得CD44(+)/CD24(-/low)亚群细胞占总细胞比例接近50%的人乳腺癌BT549细胞系为研究材料,分别从乳腺癌干性抗原CD44/CD24和基底细胞样型乳腺癌干性抗原CD49f的表达量进行分析,将BT549细胞划分成多种细胞亚群;每种细胞亚群对于通用干性抗原CD133的表达也具有明显的差异性,而且CD133表达阳性的细胞在BT549细胞中所占比例很少,说明BT549细胞在干性抗原表达方面具有明显的异质性。对多种亚群细胞分别研究发现,肌上皮细胞分化抗原CK14和α-SMA具有显著的表达量差异,且CK14表达阳性细胞占BT549细胞的比例很少,提示BT549细胞具有分化不完全的性状,同一亚群细胞分化程度的差异形成了各种异质性细胞群之间的分化差异。流式分选获得纯度大于90%的CD44(+)/CD24(-)亚群细胞以及CD44(+)/CD24(+)亚群细胞,两种亚群细胞在含有10%胎牛血清的完全培养基中可以稳定生长,并且可以独立长期维持其干性表型,说明BT549细胞中的干性表型差异不受培养条件的影响,没有出现干性表型的转化。在完全培养基、贴壁培养条件下,CD44(+)/CD24(-)亚群细胞和CD44(+)/CD24(+)亚群细胞的增殖速度、凋亡水平与野生出发细胞没有明确的差异,说明BT549细胞具有遗传稳定性。但是,野生出发细胞对低营养条件的耐受能力较CD44(+)/CD24(-)亚群细胞和CD44(+)/CD24(+)亚群细胞为优,CD44(+)/CD24(+)亚群细胞抵抗失巢凋亡能力较野生出发细胞和CD44(+)/CD24(-)亚群细胞更强,且对紫杉醇的敏感性更低,说明BT549细胞存在生物学性状的异质性。这些结果说明BT549细胞在体外既存在干性抗原表达和分化抗原表达的异质性,也存在相关生物学性状如血清依赖度、抵抗失巢凋亡能力以及药物敏感性的异质性,说明乳腺癌细胞的固有异质特性是乳腺癌异质性的来源之一。
【关键词】：肿瘤异质性 BT549 流式分选 失巢凋亡 药物敏感性
【学位授予单位】：江南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 第一章 绪论7-14
• 1.1 课题研究背景7-13
• 1.1.1 肿瘤异质性7-8
• 1.1.2 肿瘤异质性与肿瘤耐药之间的相关性8-10
• 1.1.3 肿瘤异质性与肿瘤转移之间的相关性10-11
• 1.1.4 乳腺癌干细胞的发现及其常用的分选方式11-12
• 1.1.5 乳腺癌分子分型与分化谱系12-13
• 1.2 课题研究内容13
• 1.3 课题研究意义13-14
• 第二章 人乳腺癌细胞干性抗原与分化抗原表型分析14-25
• 2.1 引言14
• 2.2 实验材料14-16
• 2.2.1 细胞系14
• 2.2.2 实验试剂14-15
• 2.2.3 实验仪器15-16
• 2.3 实验方法16-18
• 2.3.1 细胞培养方法16-17
• 2.3.2 流式细胞术17-18
• 2.4 结果与讨论18-23
• 2.4.1 六株人乳腺癌细胞CD44/CD24的表达水平18-19
• 2.4.2 人乳腺癌BT549细胞系干性及分化抗原关系的分析19-20
• 2.4.3 人乳腺癌BT549细胞系中CD44~(+)/CD24~(low)和CD44~(+)/CD24~(high)亚群的分析20-22
• 2.4.4 人乳腺癌BT549细胞系中CD44~(high)和CD44~(low)亚群的分析22
• 2.4.5 人乳腺癌BT549细胞系中CD49f~(high)和CD49~(f~(-))亚群的分析22-23
• 2.5 本章小结23-25
• 第三章 人乳腺癌BT549细胞CD44/CD24表型异质性及亚群细胞生物学性状的研究25-39
• 3.1 引言25
• 3.2 实验材料25-26
• 3.2.1 细胞系25
• 3.2.2 实验试剂25-26
• 3.2.3 实验仪器26
• 3.3 实验方法26-30
• 3.3.1 细胞培养方法26-27
• 3.3.2 流式细胞术27-28
• 3.3.3 分选纯度分析28
• 3.3.4 CFSE示踪检测细胞增殖能力[110]28
• 3.3.5 贴壁细胞凋亡检测[111]28-29
• 3.3.6 CCK-8 法检测不同浓度血清培养条件下的细胞生长状态[112]29
• 3.3.7 检测细胞失巢凋亡抗性[113]29
• 3.3.8 CCK-8 法检测细胞的药物敏感性[112]29-30
• 3.4 结果与讨论30-38
• 3.4.1 人乳腺癌BT549细胞系CD44~(+)/CD24~(-)及CD44~(+)/CD24~(+)亚群细胞在培养过程中干性表型的变化30-33
• 3.4.2 野生型BT549细胞与CD44~(+)/CD24~(-)亚群细胞、CD44~(+)/CD24~(+)亚群细胞三者间血清依赖度、抗失巢凋亡能力及药物敏感性的差异33-38
• 3.5 本章小结38-39
• 主要结论与展望39-40
• 主要结论39
• 展望39-40
• 致谢40-41
• 参考文献41-48
• 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文48

【参考文献】

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本文编号：561202