标签蛋白MBP纳米抗体的制备以及miR-4293、miR-608多态性与ESCC易感性的研究

发布时间：2017-07-20 21:07

  本文关键词：标签蛋白MBP纳米抗体的制备以及miR-4293、miR-608多态性与ESCC易感性的研究

  更多相关文章： MBP 纳米抗体 噬菌体展示 ESCC MirSNP

【摘要】：随着功能基因组学及蛋白质组学的快速发展,标签蛋白以及纳米抗体都各自发挥着重要的作用。MBP(麦芽糖结合蛋白)是现代分子克隆中一种常用的标签蛋白,目前该蛋白不仅被用于蛋白纯化中来增加易形成包涵体的目的蛋白的溶解性,而且还被用来与目的蛋白融合后利用pull-down等实验方法来研究蛋白互作功能;纳米抗体则因其具有稳定性高、特异性高、溶解性好等优点而广泛应用于生物及医学方面的多个领域。鉴于MBP标签的重要功能及纳米抗体所具有的多种优点,我们希望能够获得针对MBP蛋白的纳米抗体。在该项研究中,我们首先将纯化的抗原MBP蛋白免疫健康双峰驼,以双峰驼的外周血为材料建立纳米抗体的免疫文库,然后利用噬菌体展示技术,通过“吸附-洗脱-扩增”的亲和筛选路线来对特异抗体进行淘选、富集,通过ELISA来获得与MBP能特异结合的阳性克隆,最后利用pull-down方法来验证我们得到的纳米抗体是否能与抗原MBP具有相互作用的功能。通过以上方法,我们成功构建了双峰驼的纳米抗体文库,最终筛选并鉴定出能够与MBP相互作用的纳米抗体。基于实验室的另外一个研究方向,我们还进行了基因多态性与癌症易感型的关联研究。目前我国食管癌的发病率是全球平均发病率的7倍多,居世界第一位,其中90%以上是食管鳞状细胞癌(Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC),而遗传因素是影响ESCC的重要原因。由于microRNA及其多态性在肿瘤的发生发展中起着重要的作用,我们通过数据库及文献搜索后确定了miR-4293种子区SNP位点rs12220909 GC及miR-608成熟区非种子区的SNP位点rs4919510 CG,拟通过病例-对照的研究方法来确定这两个功能性MirSNPs与ESCC易感性的关系。结果发现,在我们所研究的773例ESCC病例和882例正常对照人群中,rs12220909 GC位点与ESCC的发病风险具有显著相关性:突变基因型GC/CC能够显著降低ESCC的发病风险(adjusted OR=0.77,95%CI:0.61-0.96);等位基因模型显示,突变等位基因C与野生型的等位点基因G相比,使ESCC的发病风险降低了23%(95%CI:0.63-0.93);对遗传模型进行的分层分析显示,吸烟及饮酒因素对该位点具有不同的影响。但是对于已被证明与多种癌症相关的mi R-608rs4919510 CG位点,在我们所研究的遗传模型中并未观察到其与ESCC的发生具有相关性。我们的结果为进一步探究miR-4293在ESCC中所起的功能作用打下了基础。
【关键词】：MBP 纳米抗体 噬菌体展示 ESCC MirSNP
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.1
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一部分 标签蛋白MBP纳米抗体的制备10-57
• 第一章 序言10-18
• 1.1 抗体10-12
• 1.2 纳米抗体12-17
• 1.3 标签蛋白MBP17-18
• 第二章 抗原蛋白MBP的制备18-25
• 2.1 材料与方法18-23
• 2.2 实验结果23-24
• 2.3 讨论24-25
• 第三章 单域重链抗体噬菌体展示文库的构建25-38
• 3.1 材料与方法26-34
• 3.2 实验结果34-37
• 3.3 讨论37-38
• 第四章 抗MBP单域重链抗体的淘选及鉴定38-48
• 4.1 材料与方法38-43
• 4.2 实验结果43-46
• 4.3 讨论46-48
• 第五章 结论48-49
• 参考文献49-57
• 第二部分MIR-4293、MIR-608多态性与ESCC易感性的关联研究57-79
• 第一章 绪论57-62
• 1.1 我国食管癌的现状57-58
• 1.2 microRNA简介58-61
• 1.3 miR-608及miR-4293的相关SNP研究61-62
• 第二章 MIR-608 RS4919510及MIR-4293 RS12220909与ESCC易感性的研究62-73
• 2.1 材料与方法62-68
• 2.2 实验结果68-71
• 2.3 讨论71-73
• 2.4 结论73
• 参考文献73-79
• 硕士期间发表论文79-80
• 致谢80-81

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本文编号：569978