姜黄素联合FAPα疫苗对黑色素瘤的影响及其机制探讨

发布时间：2017-07-20 21:22

  本文关键词：姜黄素联合FAPα疫苗对黑色素瘤的影响及其机制探讨

  更多相关文章： 姜黄素 上皮细胞间质化 成纤维细胞激活蛋白α 免疫耐受 肿瘤转移

【摘要】：肿瘤间质构成了肿瘤细胞生长、浸润转移所必需的微环境,其已成为肿瘤治疗的重要靶点。抑制肿瘤间质特异性高表达分子-成纤维细胞激活蛋白α(Fibroblast activation proteinα,FAPα)的表达,能够促进抗肿瘤因子IFN-γ与TNF-α的释放而杀死肿瘤细胞。然而包括以FAPα为靶标在内的免疫治疗策略产生的免疫效应分子IFN-γ与TNF-α可分别通过诱导吲哚胺双加氧酶(Indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)的高表达和肿瘤上皮细胞间质变(Epithelial-mesenchymal transitions,EMT)而诱发肿瘤免疫耐受和肿瘤转移。我们研究发现姜黄素能双重抑制IFN-γ诱导的IDO表达和TNF-α诱导的黑色素瘤EMT,据此,本课题首先对姜黄素的上述功能进行进一步的研究,以期为黑色素瘤的防治提供有效的作用靶点。然后采用姜黄素联合FAPα疫苗的策略,探讨其通过免疫激活和免疫效应阶段双层面抑制肿瘤生长,并消除IFN-γ、TNF-α诱导的肿瘤免疫耐受和肿瘤细胞转移的效果,为黑色素瘤的防治提供一条有效的新途径。综上所述,本研究的主要目的:首先体外探讨姜黄素对IFN-γ诱导的IDO表达和TNF-α诱导的肿瘤EMT的影响,然后体内动物实验研究姜黄素联合FAPα疫苗抗黑色素瘤的作用及其机制,以期为黑色素瘤的防治提供有效的作用靶点和防治策略。本研究所采用的研究方法:本研究所采用的研究方法包括:细胞培养、酶联免疫吸附、免疫印迹、免疫组化、蛋白原核表达与纯化等多种分子生物与免疫学方法和动物实验。本研究的主要内容:1)IPTG诱导包含FAPα核心序列片段的原核表达载体p ET28a-FAPαc,表达大量的FAPα核心多肽并加以纯化,纯化的FAPα核心多肽作为肿瘤疫苗用于后续动物免疫。2)体外研究姜黄素对IFN-γ诱导的黑素瘤IDO表达及TNF-α诱导的EMT的影响。3)动物体内实验评价姜黄素联合FAPα疫苗抗黑色瘤的疗效及相关机制探讨。本研究的研究结果:1)FAPα核心多肽在BL21工程菌中的表达是以包涵体的形式存在,且经过洗涤、纯化、复性等工艺后获得了大量高纯度的FAPα核心多肽,其纯度99%。2)免疫蛋白印迹结果表明姜黄素能够明显降低IFN-γ诱导的黑色素瘤IDO表达,此外,姜黄素亦能明显下调TNF-α诱导的Vimentin的表达水平。3)各实验组小鼠体重之间差异无统计学意义(p0.01);FAPα疫苗免疫后产生了高效价的抗FAPα抗体(P0.01);FAPα+姜黄素灌胃+Cp G组能明显延长小鼠生存期和显著抑制移植瘤的生长(P0.01)。本研究的研究结论:1)成功获得FAPα包涵体且纯度(99%)已达到后续实验对疫苗的纯度要求。2)姜黄素能双重抑制黑色素瘤B16细胞内IFN-γ诱导的IDO表达和TNF-α诱导的上皮细胞间质化。3)姜黄素联合FAPα疫苗能明显抑制小鼠黑色素移植瘤的生长和显著延长小鼠的生存期,为抗黑色瘤的防治开辟了一条新的研究思路。
【关键词】：姜黄素 上皮细胞间质化 成纤维细胞激活蛋白α 免疫耐受 肿瘤转移
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R730.51
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 第1章 绪论10-16
• 第2章 材料和方法16-30
• 2.1 材料16-21
• 2.2 方法21-30
• 第3章 实验结果30-38
• 第4章 讨论38-42
• 第5章 结论42-44
• 参考文献44-50
• 综述50-58
• 参考文献54-58
• 附录58-60
• 作者攻读学位期间的科研成果60-62
• 致谢62

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本文编号：570085