不同镇痛药对肝癌细胞生物学行为影响及其机制的研究

发布时间：2017-07-31 12:31

  本文关键词：不同镇痛药对肝癌细胞生物学行为影响及其机制的研究

  更多相关文章： 吗啡 塞来昔布 布洛芬 氯胺酮 肝癌细胞 增殖 凋亡 布洛芬 肝癌细胞PI3K/Akt/mTOR通路 IKKβ/IκBα/NF-κB通路

【摘要】：第一章不同镇痛药对肝癌细胞生物学行为影响目的：探讨不同镇痛药(吗啡、布洛芬、塞来昔布、氯胺酮)对肝癌细胞生物学行为影响。方法：人肝癌QGY-7703细胞培养至对数生长期,分别接种于培养板或25cm2培养瓶中。采用随机数字表法,将两种细胞分别随机分为13组(n=6)：不同浓度布洛芬组(IB,-3组)布洛芬终浓度分别为250 umol/L、500 umol/L、 1000umo1/L;塞来昔布组(CE1-3组)：塞来昔布终浓度分别为25umol/L、 50umol/L.100umol/L;吗啡组(M01_3组)：吗啡组终浓度分别为0.01umol/L、 10umol/L、1000umol/L；氯胺酮组(KE1-3组)：氯胺酮终浓度分别为100umol/L、 500umol/L、1000umol/L;以及正常对照组(C组)：加入等容量的RPM-1640培养基。分别于孵育24、48和72h时,采用cck-8法测定各组细胞增殖抑制率。于孵育48h后,用流式细胞术检测各组细胞凋亡率及其周期情况；采用利用Transwell小室检测各组细胞的侵袭和迁移能力。结果：与C组比较,IB1-3组、CE1-3组、MO1-3组和KE1-3组等十二组细胞的增殖抑制率均依次升高,且依照药物作用的浓度和时间的增加而依次升高,具有浓度和时间的依赖性,差异有统计学意义(P0.05)。与C组比较,IB1_3组、CE1_3组、M01-3组和KE1_3组等十二组细胞迁移和侵袭能力均降低,且依照药物作用的浓度的增加而依次降低,具有浓度依赖性,差异有统计学意义(P0.05)。与C组比较,IB1-3组、CE1-3组、M01-3组和KE1-3组等十二组细胞凋亡率均增加,且依照药物作用的浓度增加而依次增加,具有浓度依赖性,差异有统计学意义(P0.05)。与C组比较,IB,_3组、CE1-3组和MO,-3组等九组细胞的G1期细胞百分比均升高,S期和M期细胞百分比均降低,且依照药物作用浓度的增加而依次变化,具有浓度依赖性,差异有统计学意义(P0.05)；KE1-3组细胞的G1期和S期细胞百分比均升高,M期细胞百分比均降低,且依照药物作用的浓度的增加而依次变化,具有浓度依赖性,差异有统计学意义(P0.05)。结论布洛芬、塞来昔布、吗啡和氯胺酮均可以抑制人肝癌QGY-7703细胞的增殖,并可降低肝癌QGY-7703细胞的侵袭和迁移的能力,可能与其促进细胞的凋亡并使细胞周期发生阻滞有关。第二章 布洛芬抑制肝癌细胞生长的机制研究目的：探讨PI3K/Akt/mTOR通路和IKKβ/IκBα/NF-κB通路在布洛芬抑制肝癌细胞生长中的作用。方法：取对数生长期人肝癌细胞QGY-7703,采用随机分为两组,对照组(C组)：加入等容量的RPM-1640培养基；实验组(IB组)：按照不同布洛芬作用浓度分为三个亚组：IB1组(布洛芬作用浓度为250umol/L), IB2组(布洛芬作用浓度为500umol/L)、IB3组(布洛芬作用浓度为1000umol/L)。各组分别作用48后,采用Real-TimePCR测各组细胞中IKKβ、Bcl-2、PI3K、 PTEN和MMP-9基因表达的变化。用Western blot检测各组细胞中PI3K/Akt/mTOR信号通路和IKKβ/IκBα/NF-κB信号通路相关蛋白的表达。结果：1. PI3K/Akt/mTOR信号通路相关因子与C组比较,IB1组、IB2组、IB3组三组细胞PTEN mRNA和PTEN蛋白表达明显升高,且随着布洛芬作用浓度的增加依此升高,具有浓度依赖性,差异有统计学意义(P0.05)；与C组比较,IB1组、IB2组、IB3组三组细胞PI3K mRNA、Akt蛋白和mTOR蛋白的表达量均无明显差异(P0.05)；与C组比较,IB1组、IB2组、IB3组等三组细胞MMP-9 mRNA和MMP-9蛋白的表达以及p-Akt、p-mTOR蛋白的表达均显著下降,且随着布洛芬作用浓度的增加依此降低,具有良好的浓度依赖性,差异有统计学意义(P0.05)。2. IKKβ/IκBα/NF-κB信号通路相关相关因子表达的结果与C组比较,IB1组、IB2组、IB3组三组细胞IKKβ mRNA和Bcl-2mRNA表达明显下调,且依照布洛芬作用浓度的增加而依次下调,具有浓度依赖性,差异有统计学意义(P0.05)；与C组比较,IB1组、IB2组、IB3组三组细胞IKKβ、Bcl-2、p-IKKβ、p-IκBα和NF-κ Bp65蛋白的表达明显下调,且随着布洛芬作用浓度的增加依此降低,具有良好的浓度依赖性,差异有统计学意义(P0.05)。结论：布洛芬对QGY-7703细胞生长的抑制可能与其对细胞PI3K/Akt/mTOR和IKKβ/IκBα/NF-κB信号通路的调控有关。第三章镇痛药物处理后肝癌QGY-7703细胞差异表达基因的筛选目的：探究镇痛药(塞来昔布、吗啡和氯胺酮)抑制肝癌QGY-7703细胞生长的机制方法：取对数生长期的细胞,采用随机数字表法,将细胞随机分为4组(n=3):QGY-7703细胞分为：塞来昔布组(CE组)：塞来昔布作用浓度为50umol/L;吗啡组(MO组)：吗啡作用浓度为10 umol/L;氯胺酮组(KE组)：氯胺酮作用浓度为500umol/L;对照组(C组)加入等容量的RPM-1640培养基。各组培养48h后,采用全基因组表达谱芯片,筛查镇痛药物(塞来昔布、氯胺酮和吗啡)处理后QGY-7703细胞差异表达基因,并进行生物信息学功能和通路分析。结果：与C组相比,在CE组细胞中有141个基因表达增加,50个基因表达下降；而在KE组中有1032个基因表达增加,899个基因表达下降；而在MO组中有766个基因表达上升,311个基因表达下降。其中KE组和CE组两组共同调控基因有34个；KE组和MO组两组共同调控基因195个；MO组和CE组两组共同调控18基因个；KE组、CE组和MO组三组共同调控基因17个。生物学通路分析显示：与C组相比,CE组差异基因主要涉及应急、细胞的负性调节、生物大分子代谢等方面,参与PPAR信号通路、MAPK信号通路、mTOR信号通路等的改变；KE组差异基因主要涉及细胞周期、RNA的代谢等方面,参与溶酶体、基因的剪接与复制相关通路和P53信号通路等通路的改变；MO组差异基因主要涉及生物代谢、转运、RNA的代谢等方面,参与抗原的加工和提呈、自然杀伤细胞介导的细胞毒性等相关通路、MAPK信号通路等通路的改变结论：本研究成功筛选出镇痛药(塞来昔布、吗啡和氯胺酮)处理后人肝癌QGY-7703细胞差异表达的基因,生物信息学功能和通路分析显示镇痛药抑制QGY-7703细胞的生长涉及了不同的基因和通路,为探讨镇痛药抗肝癌的作用提供了有效线索并具有一定的指导意义。
【关键词】：吗啡 塞来昔布 布洛芬 氯胺酮 肝癌细胞 增殖 凋亡 布洛芬 肝癌细胞PI3K/Akt/mTOR通路 IKKβ/IκBα/NF-κB通路
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R614;R735.7
【目录】：

• 个人简历3-6
• 英文缩略词表6-9
• 摘要9-15
• ABSTRACT15-21
• 前言21-27
• 参考文献23-27
• 第一章 不同镇痛药对肝癌细胞生物学行为影响27-49
• 材料与方法27-35
• 1 材料27-29
• 2 方法29-35
• 实验结果35-45
• 讨论45-46
• 结论46-47
• 参考文献47-49
• 第二章 布洛芬抑制肝癌QGY-7703细胞生长的机制研究49-68
• 材料与方法49-60
• 1 材料49-52
• 2 方法52-60
• 实验结果60-63
• 讨论63-65
• 结论65
• 参考文献65-68
• 第三章 镇痛药处理后肝癌QGY-7703细胞差异表达基因的筛选68-78
• 材料与方法68-70
• 1 材料68-69
• 2 方法69-70
• 结果70-74
• 讨论74-75
• 结论75-76
• 参考文献76-78
• 综述78-90
• 参考文献83-90
• 致谢90-91
• 攻读学位期间发表论文91

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 彭永强;;镇痛药不可常用[J];晚霞;2012年03期

2 张映芳,符雄,秦惠基;镇痛药市场现状及研究进展[J];医药导报;2002年04期

3 陈豫清;使用镇痛药物时护士应注意的问题[J];中原医刊;2003年16期

4 赵雪松;镇痛药的发展动态[J];职大学报(自然科学版);2003年02期

5 徐国柱;镇痛药,让疼痛走开[J];中国处方药;2003年07期

6 王文军,张健;32例截瘫病人长期服用镇痛药与不服用镇痛药的临床分析[J];中国民康医学;2004年08期

7 王玉梅;夏玉叶;闵e，

本文编号：599188