HIPK2抑制非小细胞肺癌上皮间质转化及迁移侵袭的作用及机制研究

发布时间：2017-07-31 22:32

  本文关键词：HIPK2抑制非小细胞肺癌上皮间质转化及迁移侵袭的作用及机制研究

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【摘要】：[背景]随着我国环境问题的不断恶化,肺癌的发病率逐年上升,已经被国家列为需要重点防治的恶性肿瘤之一。根据肺癌的细胞类型,通常可以将其分为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)及小细胞肺癌(small cell lung cancer, SCLC)两类,其中非小细胞肺癌约占总数的80%～85%。目前针对肺癌的治疗,临床上主要以外科手术为主,结合化疗、放疗以及免疫治疗等方法。然而据统计显示,约有85%的患者在首次确诊时原发病灶已发生转移,侵犯周围淋巴结或器官,此时手术治疗效果非常差。因此,研究肺癌发生转移的原因及机制,将有利于肺癌的早期诊断和综合治疗。上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transitions, EMT)在肺癌发生发展过程中发挥着重要作用。基于EMT的过程,细胞获得更强的迁移和侵袭能力,促使肿瘤发生远处转移。寻找参与调节肺癌细胞EMT进程的相关基因,深入研究其分子机制,是当前针对肺癌分子靶向治疗的研究热点。1998年,由Kim等研究人员,通过酵母双杂交技术发现了一类蛋白,它们包含一个保守的蛋白激酶结构域,使其能够从同源异型蛋白中分离出来,因此被命名为同源结构域相互作用蛋白激酶(Homeodomain-interacting protein kinases, HIPKs), HIPKs分为HIPK1、HIPK2、HIPK3。其中HIPK2是一种主要定位于细胞核内的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶。HIPK2可以诱导或抑制转录从而调节细胞分化、增殖及凋亡。DNA损伤或氧化应激反应时,HIPK2能够激活肿瘤抑制基因p53,促进细胞凋亡。作为肿瘤抑制基因,HIPK2在多种肿瘤的发生、发展和转移过程中发挥着重要作用,但关于HIPK2在非小细胞肺癌中的具体作用尚不清楚。[目的]探讨同源结构域相互作用蛋白激酶2(HIPK2)在人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞中对上皮间质转化(EMT)及迁移侵袭的影响,并初步探讨其可能的作用机制。[方法]应用Lipofectamine 2000在NSCLC细胞株A549、H520中转染HIPK2高表达质粒及其对照质粒；应用慢病毒感染在A549细胞中构建HIPK2稳定沉默细胞系(A549-shHIPK2)及其对照细胞系；应用Lipofectamine 2000在A549-shHIPK2细胞系中转染转录因子ZEB1的干扰质粒及其对照质粒；Western blotting检测HIPK2表达水平及其对EMT标记蛋白的影响；应用细胞划痕实验、Transwell实验、Matrigel实验检测细胞迁移、侵袭能力。[结果]高表达HIPK2能够增强NSCLC细胞上皮标记蛋白的表达、抑制间质标记蛋白的表达,对EMT起抑制作用；同时,高表达HIPK2也能够抑制细胞的迁移和侵袭能力。沉默HIPK2则促进EMT发生、促进细胞的迁移和侵袭。干扰转录因子ZEB1的表达可以缓解HIPK2沉默引起的EMT和迁移侵袭现象。[结论]HIPK2具有抑制NSCLC细胞EMT和迁移侵袭的作用,其发生机制可能与转录因子ZEB1有关。
【关键词】：同源结构域相互作用蛋白激酶2 非小细胞肺癌 上皮间质转化 迁移 侵袭
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 符号说明10-12
• 前言12-17
• 实验材料17-22
• 实验方法22-32
• 实验结果32-36
• 讨论36-39
• 结论39-40
• 附图40-49
• 参考文献49-53
• 致谢53-54
• 硕士期间发表论文情况54-55
• 学位论文评阅及答辩情况表55

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本文编号：601440