DADS对uPAR高表达SW480细胞迁移侵袭的影响

发布时间：2017-07-31 23:16

  本文关键词：DADS对uPAR高表达SW480细胞迁移侵袭的影响

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【摘要】：目的:二烯丙基二硫(DADS)是大蒜中的主要有效成分,具有很高的开发潜力。我们之前工作证实,DADS能在体内外抑制人结肠癌细胞增殖与迁移侵袭。尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)与肿瘤细胞侵袭转移及EMT密切相关,阻断uPAR信号传导通路可逆转肿瘤细胞EMT、抑制肿瘤细胞侵袭转移。迄今,鲜有DADS抑制肿瘤细胞EMT及侵袭转移作用的相关报道。本课题在前期研究的基础上,通过构建uPAR高表达的SW480细胞系,研究DADS下调uPAR信号通路介导抑制人结肠细胞EMT与迁移侵袭,证实DADS在对肿瘤侵袭转移和EMT的抑制过程中,uPAR起到关键性作用,对DADS进行临床应用开发,提供实验依据。方法:pIRES2-EGFP-uPAR真核表达载体转染SW480细胞,构建稳定uPAR高表达SW480细胞系。Transwell侵袭实验与划痕实验检测DADS对uPAR高表达SW480细胞迁移侵袭的作用。RT-PCR和Western blot检测DADS对uPAR高表达SW480细胞EMT及uPAR相关信号分子的影响。裸鼠移植瘤实验检测DADS对uPAR高表达SW480细胞移植瘤生长的作用。结果:1.成功建立稳定uPAR高表达的SW480细胞。将pIRES2-EGFP和pIRES2-EGFP-uPAR真核表达载体分别转染SW480细胞,通过荧光显微镜,可以观察到绿色荧光,证明pIRES2-EGFP/uPAR和pIRES2-EGFP已经导入到SW480细胞当中。RT-PCR与Western blot显示,uPAR/SW480细胞uPAR mRNA和蛋白均具有较高的表达量,表明建立稳定uPAR高表达的SW480细胞。2.DADS对uPAR高表达SW480细胞迁移的影响。划痕实验显示,uPAR高表达细胞的迁移距离明显大于SW480细胞(P0.05)。DADS处理后,空载体细胞的迁移距离明显低于SW480细胞和uPAR高表达细胞(P0.05)。uPAR高表达细胞的迁移距离明显低于DADS处理前ii(p0.05)。表明upar高表达增强sw480细胞的迁移能力,dads可抑制upar高表达sw480细胞的迁移。3.dads对upar高表达sw480细胞侵袭的影响。侵袭实验显示,upar高表达组穿膜细胞较sw480组明显增加(p0.05)。dads作用24h后,空载体细胞穿膜细胞明显少于sw480组与upar高表达组(p0.05)。upar高表达组较处理前穿膜细胞显著减少(p0.05)。表明dads可抑制upar高表达sw480细胞的侵袭能力,upar高表达可增强侵袭作用。4.dads对upar高表达sw480细胞emt的影响rt-pcr和westernblot显示,upar高表达组vimentin表达较sw480细胞明显上调,e-cadherin显著下调(p0.05)。dads作用后,空载体细胞vimentin表达较sw480细胞与upar高表达组明显下调和e-cadherin显著上调(p0.05),upar高表达组较处理前vimentin明显下调与e-cadherin上调(p0.05)。表明upar高表达可促进emt,dads通过下调upar高表达sw480细胞vimentin与上调e-cadherin表达抑制emt。5.dads对upar相关分子的影响。rt-pcr和westernblot显示,upar高表达组upar、upa与mmp-9较sw480细胞明显上调(p0.05)。dads作用后,空载体细胞upar、upa与mmp-9表达较sw480细胞与upar高表达组明显下调(p0.05),upar高表达组较处理前upar、upa与mmp-9明显下调(p0.05)。6.dads与upar高表达对裸鼠成瘤能力的影响。裸鼠实验表明,dads处理组与相应未处理组比较,肿瘤生长速度明显减慢(p0.05),upar高表达组较sw480组移植瘤生长明显增快(p0.05)。dads处理组的瘤重较相应未处理组显著性减少(p0.05),upar高表达组明显重于sw480组(p0.05)。dads处理组较未处理组与upar高表达组移植瘤细胞异型性降低。dads处理后e-cadherin阳性表达明显增强,vimentin、ki-67、cd34阳性表达明显降低;upar高表达组的ki-67、cd34、vimentin阳性表达均明显增强,e-cadherin阳性表达明显降低。结论:1.upar高表达可促进sw480细胞的emt、迁移侵袭及成瘤能力。2.dads可抑制upar高表达的sw480细胞的emt、迁移侵袭及成瘤能力。
【关键词】：二烯丙基二硫 uPAR 迁移 侵袭 EMT
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.35
【目录】：

• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 第1章 前言13-15
• 第2章 材料与方法15-27
• 1 实验材料15-17
• 2. 实验方法17-27
• 第3章 结果27-49
• 1. 稳定 u PAR 高表达的 SW480 细胞系的建立27-30
• 2. u PAR 高表达对 SW480 细胞生物学特性的影响30-33
• 3. DADS 与 uPAR 高表达对 SW480 细胞 EMT 的影响33-37
• 4. DADS 对 u PAR 相关分子的影响37-43
• 5. DADS 与 u PAR 高表达对 SW480 细胞裸鼠成瘤能力的影响43-49
• 第4章 讨论49-53
• 结论53-55
• 参考文献55-61
• 综述61-67
• 参考文献64-67
• 读硕期间撰写的论文67-69
• 致谢69

【参考文献】

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1 Ko Eun Lee;Pham Ngoc Khoi;Yong Xia;Jung Sun Park;Young Eun Joo;Kyung Keun Kim;Seok Yong Choi;Young Do Jung;;Helicobacter pylori and interleukin-8 in gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2013年45期

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本文编号：601547