MiR-138通过下调ISG15的表达增强TRAIL诱导肝癌细胞凋亡的作用

发布时间：2017-08-04 09:41

  本文关键词：MiR-138通过下调ISG15的表达增强TRAIL诱导肝癌细胞凋亡的作用

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【摘要】：目的:研究肝癌细胞系对TRAIL耐药的机制,探究ISG15及miR-138在TRAIL耐药机制中的作用,进一步提高TRAIL对肿瘤细胞的杀伤作用。方法:首先选取四种肝癌细胞系LH86、SMMC-7721、HLC-Z01、Huh7细胞,以不同浓度TRAIL(1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml)处理四种的肝癌细胞系(4h、6h、8h、12h),MTT实验检测细胞活力,筛选出对TRAIL敏感的肝癌细胞系及对TRAIL耐药的肝癌细胞系。通过定量PCR及western blot实验检测ISG15及miR-138在TRAIL敏感细胞及与TRAIL耐药细胞中的表达差异。利用真核载体构建及细胞转染技术在TRAIL敏感细胞中沉默ISG15且在TRAIL耐药细胞中过表达ISG15,通过western blot实验分析其对TRAIL诱导细胞凋亡的影响。通过TargetScan预测分析,ISG15可能是miR-138的靶基因。利用细胞转染技术在TRAIL敏感细胞及耐药细胞中过表达miR-138,通过定量PCR及western blot实验检测过表达miR-138对ISG15表达的影响,并通过western blot实验分析其对TRAIL诱导细胞凋亡的影响。结果:1.TRAIL有肝癌细胞凋亡的作用,LH86、SMMC-7721细胞对TRAIL敏感,Huh7、HLC-Z01细胞对TRAIL耐药。当TRAIL浓度为10ng/ml,处理时间为8h时效果最佳。2.在TRAIL敏感细胞中ISG15的表达水平较TRAIL耐药细胞低,而TRAIL敏感细胞miR-138的本底表达水平较耐药细胞高。3.在敏感细胞中过表达ISG15能抑制TRAIL诱导细胞凋亡的作用,相反,在耐药细胞中沉默ISG15能增强TRAIL诱导细胞凋亡的作用,提示ISG15在TRAIL诱导细胞凋亡的过程中起调控作用,能抑制细胞凋亡。4.在敏感细胞及耐药细胞中过表达miR-138能够抑制ISG15的表达,表明ISG15为miR-138的靶基因。5.在敏感细胞及耐药细胞中过表达miR-138能够增强TRAIL诱导细胞凋亡的作用。表明miR-138能调节TRAIL诱导细胞凋亡的作用。6.当同时过表达ISG15及miR-138时,TRAIL诱导细胞凋亡的效果较本底水平降低。表明miR-138是通过调控ISG15的表达增强TRAIL诱导细胞凋亡的作用。结论:1.ISG15在TRAIL诱导肝癌细胞凋亡过程中起重要的调控作用。2.miR-138通过调节ISG15的表达增强TRAIL诱导肝癌细胞凋亡的作用。
【关键词】：肝癌 肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体 干扰素刺激基因ISG15 微小RNA(miR-138) 肿瘤耐药
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 主要缩略词中英文对照索引9-12
• 第1章 前言12-18
• 1.1 肝癌概述12-13
• 1.2 TRAIL介绍13-14
• 1.3 ISG15与肿瘤14-15
• 1.4 MiRNA与肿瘤15-18
• 第2章 材料与方法18-28
• 2.1 实验细胞18
• 2.2 抗体与其他主要试剂18
• 2.3 溶液配制18
• 2.4 主要实验仪器18-19
• 2.5 实验方法19-28
• 2.5.1 细胞培养冻存及复苏19-20
• 2.5.2 MTT实验检测细胞活性20
• 2.5.3 Western Blot实验20-22
• 2.5.4 RNA提取及定量PCR检测22-24
• 2.5.5 载体构建24-25
• 2.5.6 细胞转染实验25-26
• 2.5.7 数据分析26-28
• 第3章 结果28-34
• 3.1 TRAIL对肝癌细胞杀伤作用的检测28-29
• 3.2 ISG15对TRAIL诱导细胞凋亡的影响29-30
• 3.3 MiR-138与ISG15的关系30-32
• 3.4 MiR-138对TRAIL诱导细胞凋亡的影响32-34
• 第4章 讨论34-40
• 4.1 分析与讨论34-37
• 4.2 本实验的意义及展望37-40
• 第5章 结论40-42
• 参考文献42-48
• 综述 Micro RNA 在肝癌中的作用48-58
• 参考文献54-58
• 附录58-60
• 致谢60

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本文编号：618913