GPC5对人肺腺癌细胞生物学行为的影响

发布时间：2017-08-04 15:31

  本文关键词：GPC5对人肺腺癌细胞生物学行为的影响

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【摘要】：目的肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,一项多中心的全基因组关联研究(GWAS)发现位于13q31.3位点的磷脂酰肌醇蛋白聚糖5(glypican-5,GPC5)可能增加患肺腺癌的风险。目前在哺乳类基因组中共发现GPC1到GPC6的6个磷脂酰肌醇蛋白聚糖成员,均归属于磷脂酰肌醇蛋白聚糖(heparan sulphate proteoglycans,HSPGs)大类,HSPGs主要通过糖基-磷脂酰肌醇锚锚定在细胞膜的表面,从而在细胞生长及分化中扮演重要角色。对于GPC5基因的研究发现,GPC5基因的高表达或低表达与人体多部位、多种类型的肿瘤的发生发展相关,例如淋巴瘤、横纹肌肉瘤及结肠癌等。但关于GPC5如何在肺腺癌中发挥作用及其在细胞水平对肺腺癌细胞生物学活动的影响如何,当前尚存在争议。本课题构建GPC5相关的肺腺癌细胞模型,全面研究GPC5对肺腺癌细胞生物学活动的促进或抑制作用,从而为进一步探索GPC5在肺腺癌中的功能定义及分子机制探索提供理论依据。方法1.采用逆转录PCR(RT-PCR)、实时定量RT-PCR(qRT-PCR)分析肺腺癌细胞系中GPC5基因mRNA表达情况;同时,采用Western blot(WB)的方法验证肺腺癌细胞系中GPC5基因在蛋白水平的不同表达情况。2.利用真核载体构建GPC5过表达载体及干扰载体,并通过脂质体法将GPC5过表达载体及干扰载体转入细胞,构建GPC5过表达及GPC5沉默细胞模型。3.利用CCK-8法观察GPC5过表达及沉默对细胞生长情况的影响。4.通过流式细胞荧光分析的方法,探究GPC5过表达及沉默对细胞周期及凋亡的相关影响。5.通过Transwell小室系统观察肺腺癌细胞的侵袭及迁移活动,探究GPC5过表达及沉默对细胞迁移能力和侵袭能力的相关影响。结果1.检测GPC5基因在4株人肺腺癌细胞系(A549、H1299、H358和H1975)和正常肺组织中的mRNA表达情况,发现与正常肺组织相比,GPC5基因的表达量在这4株人肺腺癌细胞系中均较低;仅对基因表达的细胞系之间的比较分析,发现在A549细胞中GPC5基因低表达,在H1299细胞中则高表达;对蛋白表达的检测分析与mRNA水平一致。2.通过前期mRNA及蛋白表达检测,选取A549细胞完成GPC5过表达细胞系模型的建立及鉴定工作,选取H1299细胞完成GPC5沉默细胞系模型的建立及鉴定工作。3.与阴性对照组比较分析,GPC5过表达细胞系生长受到抑制,转染后第三天抑制作用最强,对照组细胞生长曲线OD值为2.21±0.09,过表达组OD值为1.51±0.07;GPC5沉默细胞系细胞生长得到促进,转染后第四天促进效果最明显,对照组细胞生长曲线OD值为1.81±0.07,干扰组OD值为2.51±0.05,两组的差异比较均具有统计学意义(p0.05)。4.GPC5基因过表达引起A549细胞G1期增加,G2、S期降低,与对照组相比G1期和S期变化差异具有统计学意义(p0.05);GPC5基因沉默引起H1299细胞G1、G2期下降,S期增高,与对照组G1期和S期比率变化差异具有统计学意义(p0.05)。5.与阴性对照相比,GPC5基因过表达细胞总凋亡率由10.03%降到8.99%,但差异不具有统计学意义,同样在GPC5沉默细胞系H1299中也未观察到细胞总凋亡率之间的差异。6.GPC5过表达实验组迁移到膜下侧的细胞数明显减少,穿膜细胞数为(28.2±2.5),阴性对照组则为(59.6±1.81)。同时对于GPC5沉默实验组,GPC5沉默实验组穿膜细胞数呈现增加的趋势,沉默组细胞的穿膜细胞数为(14±2),阴性对照组则为(2.33±0.58),与阴性对照组相比,差异具有统计学意义(p0.05)。7.GPC5过表达实验组穿过基质胶后进入膜下侧的细胞数明显减少,过表达实验组穿膜细胞数(9.2±0.7),阴性对照组(20.3±2)。同时对于GPC5沉默实验组,GPC5沉默组的穿膜细胞数呈现增加的趋势,沉默组(20±2),阴性对照组(3.67±0.58),两组之间进行比较,P值小于0.05,差异具有统计学意义结论GPC5可以抑制人肺腺癌细胞的生长和细胞周期、细胞迁移及侵袭活动,提示GPC5可能为抑癌基因,可能在肺腺癌的发生及发展中发挥作用。
【关键词】：GPC5 肺腺癌 增殖 周期 凋亡 侵袭和迁移
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 缩略语表4-6
• 英文摘要6-9
• 中文摘要9-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 GPC5基因在肺腺癌细胞中的表达分析13-29
• 2.1 实验材料13-16
• 2.2 研究对象16
• 2.3 研究方法16-23
• 2.4 结果23-27
• 2.5 讨论27-29
• 第三章 GPC5对肺腺癌细胞生物学行为的影响29-54
• 3.1 实验材料29-31
• 3.2 研究对象31
• 3.3 实验方法31-39
• 3.4 实验结果39-51
• 3.5 讨论51-54
• 全文结论54-55
• 参考文献55-59
• 文献综述GPC5基因以及其在肺癌中的上下游分子调控机制59-71
• 参考文献66-71
• 攻读学位期间发表的论文71-72
• 致谢72

【参考文献】

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1 饶文;余祖滨;向颖;吴龙;邬娜;吴亚楠;白莉;李亚斐;;GPC5基因在肺腺癌组织中差异表达和突变分析[J];第三军医大学学报;2014年11期

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本文编号：620323