人源性肝癌组织冻存复苏皮下移植模型的初步建立

发布时间：2017-08-04 21:38

  本文关键词：人源性肝癌组织冻存复苏皮下移植模型的初步建立

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【摘要】：研究目的：将手术切除的新鲜人肝癌组织冻存复苏后移植于免疫缺陷裸鼠皮下以建立人源性肝癌组织冻存复苏皮下移植模型并初步评估其应用价值。材料与方法：取5例原发性肝细胞癌患者手术切除的新鲜肝癌组织,分别标记为HCC01, HCC02, HCC03, HCC04, HCC05肿块离体30min内完成家属标本过目和病理科取材后,各例肝癌组织用Hanks平衡液冲洗后按照不同冻存时间分别随机分为A组(7d),B组(30d),C组(90d),D组(180d)四组。放入冻存管中标记冻存时间,液氮中保存备用于肝癌冻存复苏皮下移植模型的建立。按照各例肝癌组织冻存时间分组将冻存的人肝癌组织复苏后移植于裸鼠皮下以建立人源性肝癌组织冻存复苏皮下移植模型。5例原代人肝癌组织和各组皮下移植瘤常规浸泡于福尔马林、中性甲醛溶液中固定,进行石蜡包埋切片、HE染色用于病理学形态观察,免疫组化测定肝细胞抗原(Hep Par 1)、甲胎蛋白(a-fetoprotein,AFP)、CD34的表达。观察记录A组(7d),B组(30d),C组(90d),D组(180d)复苏后裸鼠皮下移植的成瘤率、生长速度、瘤体体积,通过对比各组皮下移植瘤的大体观形态、镜下病理组织特点、免疫组化Hep Par 1、AFP、CD34的表达,以及对比同种肝癌组织各组皮下移植瘤与原代肝癌的微血管密度(microvascular decompression,MVD)计数对人源性肝癌组织冻存复苏皮下移植瘤模型进行初步的评价。结果：5例手术切除的原发性肝癌组织,术后经病理确诊为原发性肝细胞癌。各例肝癌的A组(7d),B组(30d),C组(90d),D组(180d)冻存的肝癌组织经复苏后共移植至60只雄性裸鼠皮下,其中51只可见肉眼皮下成瘤,总成瘤率达85.0%。4组瘤体生长速度基本相同(P=0.9540.05),最终成瘤体积A组(867.24±29.81),B组(889.30±13.88),C组(862.10±29.41),D组(856.30±25.25)均无明显差异,但D组(180d)较A组(7d)裸鼠皮下瘤体的生长潜伏期长。人源性肝癌组织冻存复苏皮下移植瘤体在裸鼠体内可以保持稳定生长,未出现成瘤后自行消退。4组肝癌冻存复苏裸鼠皮下移植瘤HE染色均示肿瘤呈癌巢状分布、核质比例失调,细胞核明显异形改变,免疫组化染色Hep Par1、AFP、CD34呈阳性,微血管密度较原代肝癌组织无差异。各组移植瘤镜下病理组织形态、免疫组化结果均能与人肝癌组织生物学特性保持一致。结论：成功建立了人源性肝癌组织冻存复苏裸鼠皮下移植模型,使用低温冻存技术保存的人肝癌组织,经复苏后能够成功建立人肝癌裸鼠皮下荷瘤模型。不同的冻存时间对皮下移植瘤生物学特性无明显影响,提示了肝癌组织低温冻存的可行性和人肝癌组织冻存复苏皮下移植模型的初步建立,也为临床肝癌组织保存、肝癌组织标本库的建立提供了应用价值。
【关键词】：肝癌 异种移植 动物模型
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 本文主要英汉缩略名词对照表11-12
• 前言12-15
• 实验方案流程图15-16
• 1. 材料和方法16-22
• 1.1 实验动物16
• 1.2 实验材料16-17
• 1.3 肝癌组织的冻存17-18
• 1.4 冻存肝癌组织复苏18
• 1.5 人源性肝癌冻存复苏皮下移植模型的建立18-20
• 1.6 HE染色20
• 1.7 Hep Par 1、AFP、CD34蛋白水平的表达20-21
• 1.8 结果的判定21
• 1.9 统计学方法21-22
• 2. 结果22-29
• 2.1 一般情况及大体观察22
• 2.2 裸鼠皮下成瘤率22
• 2.3 皮下移植瘤生长情况22-24
• 2.4 裸鼠肝癌皮下移植瘤大体观察24
• 2.5 HE染色病理结果24-25
• 2.6 Hep Par 1、AFP、CD34的表达及血管密度MVD的测定25-29
• 3. 讨论29-33
• 4. 结论33-34
• 参考文献34-38
• 综述38-46
• 参考文献43-46
• 攻读学位期间的科研成果46-47
• 致谢47

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本文编号：621872