斯氏艾美尔球虫可溶性蛋白对小鼠结肠癌抑制作用及免疫机制初步研究

发布时间：2017-08-06 17:16

  本文关键词：斯氏艾美尔球虫可溶性蛋白对小鼠结肠癌抑制作用及免疫机制初步研究

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【摘要】：研究表明多种原虫(阿米巴原虫、克氏锥虫、柔嫩艾美尔球虫、恶性疟原虫、刚地弓形虫等)具有抗肿瘤作用。这些原虫的感染或其裂解蛋白能活化抗原递呈细胞(APC),激活淋巴细胞,促进T细胞向Th1方向分化,改善肿瘤微环境,减少癌症局部的抑制性细胞和细胞因子,促进癌细胞凋亡。柔嫩艾美尔球虫抗原对机体无毒性,在抗癌和抗病毒感染中已产生良好的效果。为了研究艾美尔属球虫蛋白的抗肿瘤作用,了解球虫蛋白的免疫调节作用及机制,本实验选取兔致病力最强的斯氏艾美尔球虫(E.stiedai),提取卵囊可溶性蛋白(ESCA),并应用流式细胞术(FCM)、免疫荧光组织化学等试验方法检测ESCA对小鼠结肠癌(CT26)肿瘤细胞的生长、增殖影响及荷瘤小鼠免疫指标的变化情况。主要研究内容如下:(1)ESCA抗小鼠结肠癌有效浓度筛选108个E.stiedai卵囊经研磨、超声破碎、离心后获得ESCA,建立CT26皮下肿瘤模型,应用不同剂量ESCA腹腔注射荷瘤小鼠,观察肿瘤生长曲线、相对肿瘤增值率、小鼠生存率和外周血淋巴细胞增殖能力,筛选出ESCA抗结肠癌(CT26)的最佳有效浓度为50μg/d。(2)ESCA抗小鼠结肠癌免疫作用机制研究皮下接种结肠癌细胞后ESCA(50μg/d)连续注射5d,25d后检测免疫指标变化。结果显示ESCA能够显著抑制小鼠结肠癌CT26皮下肿瘤的生长;脾脏树突状细胞表面主要组织相容性复合体MHCⅠ、MHCⅡ和共刺激分子CD80、CD86的表达显著升高,并提高了其分泌IL-12的水平,活化了树突状细胞;ESCA增强NK细胞杀伤作用,小鼠脾脏中NK细胞数量增加,其表面的杀伤相关分子CD107表达升高,脾和腋下淋巴结NK细胞分泌的IFN-γ水平明显升高,提示NK细胞的功能增强;ESCA组小鼠脾脏、腋下淋巴结和肠系膜淋巴结中CD8+T细胞分泌的IFN-γ水平升高,脾脏和腋下淋巴结中CD8+T细胞表面CD107表达增加,说明ESCA能够激活CD8+T细胞,诱导CTL作用;小鼠外周血淋巴细胞CD4+/CD8+比值升高,提示小鼠免疫处于免疫增强状态;在对肿瘤血管生成研究中表明,ESCA组肿瘤组织中血管内皮细胞表面标志CD31明显降低;ESCA体内致敏的淋巴细胞能够显著抑制CT26肿瘤细胞增殖;建立CT26肿瘤细胞肺转移模型,研究ESCA对肿瘤转移的影响,结果显示小鼠肺脏肿瘤转移结节数量显著降低,小鼠生存率明显提高。ESCA能够增强小鼠抗肿瘤免疫反应,抑制肿瘤生长和转移,其免疫作用机制将为研究多种原虫的抗肿瘤作用提供理论依据。
【关键词】：斯氏艾美尔球虫 结肠癌 免疫机制 肿瘤转移
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.35
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 前言9-10
• 第一篇 文献综述10-19
• 第一章 抗肿瘤细胞免疫机制10-12
• 1.1 T细胞10
• 1.2 自然杀伤（NK）细胞10-11
• 1.3 树突状细胞（DC）11
• 1.4 免疫抑制细胞11-12
• 第二章 结直肠癌（CRC）免疫治疗研究进展12-15
• 1.1 结直肠癌（CRC）疫苗12-14
• 1.2 抗体治疗结直肠癌（CRC）14
• 1.3 联合治疗14
• 1.4 展望14-15
• 第三章 原虫抗肿瘤免疫机制研究进展15-19
• 1.1 原虫影响宿主抗肿瘤细胞免疫反应15-17
• 1.2 原虫影响宿主抗肿瘤体液免疫反应17
• 1.3 原虫改善肿瘤微环境17-18
• 1.4 展望18-19
• 第二篇 研究内容19-44
• 第一章 斯氏艾美尔球虫可溶性蛋白（ESCA）抗结肠癌有效剂量筛选19-27
• 1.1 材料与方法19-22
• 1.2 结果22-25
• 1.3 讨论25-26
• 1.4 小结26-27
• 第二章 斯氏艾美尔球虫可溶性蛋白对鼠结肠癌抑制作用及免疫机理研究27-44
• 1.1 材料与方法27-31
• 1.2 结果31-42
• 1.3 讨论42-43
• 1.4 小结43-44
• 结论44-45
• 参考文献45-53
• 附录53-54
• 作者简介54-55
• 致谢55

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本文编号：630727