生物钟基因Bmal1对口腔鳞癌细胞影响的初步研究

发布时间：2017-08-06 18:15

  本文关键词：生物钟基因Bmal1对口腔鳞癌细胞影响的初步研究

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【摘要】：口腔癌(oral cancer)指的是发生于口腔及其邻近解剖部位的恶性肿瘤,约占全身恶性肿瘤的2%-3%,其发病率高,据统计在全球范围约为4.7~32.2/10万,其中90%为鳞状细胞癌(oral squamous cancer cell,OSCC),位居世界常见癌症的第六位。其主要的治疗手段为手术以及放化疗治疗,虽然目前取得了较为肯定的进展,但其患者的5年总生存率依旧徘徊在50%~60%。而且口腔癌的位置特殊,导致患者进食,说话,颜面部美观等都受到极大的影响,生活质量严重下降。生物体在睡眠/觉醒、进食等行为以及各种生理、生化、代谢过程遵循着约24小时的周期性变化,称为昼夜节律(Circadian rhythms)。昼夜节律的紊乱会导致肿瘤的发生,同时也发现一些肿瘤细胞中生物钟相关基因表达异常。Bmal1作为生物钟系统中重要的正反馈原件,位于该系统的上游,在维持昼夜节律中起着重要作用。近年来研究认为Bmal1与肿瘤的发生发展存在着密切联系,现已发现Bmal与结肠癌,乳腺癌,血液淋巴瘤等的发生发展及预后有重要作用,尚未见关于Bmal1与口腔鳞癌关系的研究报道,故本实验通过构建Bmal1超表达载体,转染口腔鳞癌细胞SCC-15,构建Bmal1超表达稳定细胞株,观察其对鳞癌细胞生长的影响,以及对其他生物钟相关因子的影响,为口腔鳞癌的靶向治疗提供新的理念和思路。目的通过构建Bmal1超表达载体,慢病毒转染口腔鳞癌细胞SCC-15,构建Bmal1超表达稳定细胞株,观察其对鳞癌细胞生长的影响,以及超表达Bmal1对其下游基因,几个重要的细胞增殖和凋亡基因表达的影响,为口腔鳞癌的靶向治疗提供新的理念和思路。方法(1)培养口腔鳞癌细胞株SCC-15和CAL-27以及正常对照组Ha Cat细胞,半定量PCR以及Western蛋白印迹方法检测Bmal1的表达量;(2)构建Bmal1超表达载体,慢病毒转染口腔鳞癌细胞SCC-15,设立SCC-15/vector空载体对照组和SCC-15/Lv-Bmal1实验组,培养72h,CCK-8检测,克隆形成实验,检测各组细胞的增长速率。(3)培养对照组SCC-15/vector和实验组SCC-15/Lv-Bmal1细胞,处理后行流式细胞仪检测其周期和凋亡。(4)实时荧光定量PCR(Real-time Polymerase chain reaction,RT-PCR)检测超表达Bmal1对Bax,P53,Rb,cyclin B1和CDC2表达量的影响。结果(1)与对照组Ha Cat细胞相比,Bmal1在OSCC细胞(SCC-15和CAL-27)表达下降,特别是SCC-15(P0.01);(2)构建SCC-15/Lv-Bmal1稳定细胞株,通过CCK-8检测,SCC-15/lv-Bmal1组细胞增殖与SCC-15/vector组相比,明显减少(P0.05)。SCC-15组和SCC-15/vector组各时间点在细胞增殖无显著性差异。克隆形成实验,SCC-15/lv-Bmal1组与对照组相比细胞克隆数减少约50%(P0.01)。(3)流式细胞仪检测,SCC-15/lv-Bmal1组细胞周期阻滞在G1/S检验点,与SCC-15/vector组相比,细胞积累在在G1/G0期(P0.05),S期细胞比例减少(P0.05),G2/M期细胞比例减少(P0.01)。细胞凋亡检测表明,SCC-15/lv-Bmal1组细胞凋亡率明显高于对照组(P0.01),分别为20.91±3.13%和6.92±1.15%。(4)通过q RT-PCR分析发现,Bmal1超表达的SCC-15/lv-Bmal1组与对照组相比,促凋亡基因P53,Bax和Rb增加,促细胞增殖基因cyclin B1和CDC2减少。结论在口腔鳞癌细胞中,Bmal1呈低表达状态,Bmal1能抑制SCC-15细胞的生长,促进细胞的凋亡,提示Bmal1在SCC-15中充当抑癌基因的作用,为口腔鳞癌的靶向治疗提供实验依据以及新的理念和思路。
【关键词】：Bmal1 口腔鳞癌 增殖 凋亡 超表达
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.85
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-14
• 1 材料与方法14-21
• 2 结果21-27
• 3 讨论27-31
• 全文总结31-32
• 参考文献32-36
• 附录36-40
• 文献综述40-49
• 参考文献45-49
• 致谢49-51
• 攻读硕士学位期间发表论文51

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本文编号：630913