X射线照射联合苦参碱对肝癌HepG2细胞人宫颈癌基因-1及相关基因表达的影响

发布时间：2017-08-07 07:33

  本文关键词：X射线照射联合苦参碱对肝癌HepG2细胞人宫颈癌基因-1及相关基因表达的影响

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【摘要】：目的：探讨中药制剂苦参碱(Matrine)对人肝癌细胞HepG2的增殖抑制效应和对辐射敏感性的影响；研究X射线照射联合中药制剂苦参碱对HepG2细胞人宫颈癌基因HCCR-1 (Human Cervical Cancer Oncogene-1)及其相关基因表达的影响。方法：1、于体外培育人肝癌细胞HepG2,光镜下观察细胞的生长状态,取处于生长对数期的细胞试验。2、以培养基稀释的不同浓度苦参碱处理人肝癌细胞HepG2,其终浓度0.2mg/ml、0.4 mg/ml、0.8 mg/ml、1.6mg/ml、3.2mg/ml。3、MTT法研究苦参碱对HepG2细胞增殖的抑制效应。4、应用克隆形成法检测,探讨中药制剂苦参碱对HepG2细胞辐射敏感性的效应。5、应用Hoechst33258荧光染色法检测HepG2细胞凋亡的形态学变化。6、应用蛋白质印迹法(Western blot)检测苦参碱作用24h后,HCCR-1及其相关蛋白表达水平。结果：1、MTT法结果表明,苦参碱的浓度越高,其对人肝癌HepG2细胞的增殖抑制效应越明显,该抑制效应呈现一定时间-剂量依赖关系。0.2 mg/ml苦参碱对HepG2细胞的增殖抑制率30%。2、克隆形成实验表明,苦参碱处理HepG2细胞4h后再予X射线辐照,联合组比单独辐照组存活率明显降低(P0.01)。结果表明苦参碱对于HepG2细胞有显著辐射增敏效应。3、Hoechst33258荧光染色结果表明,在X射线处理后24h联合组比单独辐照组表现出更为明显的细胞凋亡形态学变化。4、蛋白质印迹法检测结果表明,在辐照后24h,联合组同辐照组相比,HCCR-1蛋白表达量降低,p53和Bax蛋白的表达水平增高(P0.05)。结论：1、苦参碱能够明显抑制体外培育的肝癌HepG2细胞的增殖效应,增强对于HepG2细胞辐射敏感性。2、苦参碱能降低肝癌HepG2细胞的原癌基因HCCR-1蛋白表达水平,增加其相关基因p53、Bax蛋白表达水平。3、苦参碱对HepG2细胞有增殖抑制效应。其机制可能与降低HCCR-1基因表达,增加其相关基因p53、Bax表达水平,而抑制HepG2细胞增殖,促进细胞凋亡有关。
【关键词】：苦参碱 HepG2细胞 辐射敏感性 凋亡 HCCR-1
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 中文摘要3-4
• Abstract4-8
• 第一章 前言8-15
• 1.1 苦参碱简介8-9
• 1.2 苦参碱抗肿瘤效用9-12
• 1.2.1 抑制肿瘤细胞的增殖9
• 1.2.2 诱导肿瘤细胞的分化和凋亡9-10
• 1.2.3 抗肿瘤细胞侵袭转移效用10
• 1.2.4 抑制肿瘤新生血管的形成过程10-11
• 1.2.5 逆转肿瘤细胞的耐药性11-12
• 1.2.6 诱导肿瘤细胞的自噬作用12
• 1.3 HCCR-1基因与其功能相关基因p53、Bax12-15
• 1.3.1 HCCR-1基因的结构及功能12-13
• 1.3.2 HCCR-1基因与p53及其下游因子关系13
• 1.3.3 HCCR-1基因与苦参碱13-15
• 第二章 材料和方法15-29
• 2.1 试剂,材料和仪器15-20
• 2.1.1 实验用药物15
• 2.1.2 主要实验试剂15-16
• 2.1.3 细胞株16
• 2.1.4 主要仪器和设备16-17
• 2.1.5 主要溶液的配制17-20
• 2.2 试验方法20-29
• 2.2.1 HepG2细胞的培养及冻存20-22
• 2.2.2 MTT比色法22-23
• 2.2.3 克隆形成抑制实验检测苦参碱对HepG2细胞的辐射增敏效应23-24
• 2.2.4 Hoechst33258荧光染色检测24-25
• 2.2.5 Western blot法25-28
• 2.2.6 统计学方法28-29
• 第三章 实验结果29-33
• 3.1 MTT法检测不同浓度的苦参碱对肝癌HepG2细胞增殖的影响29-30
• 3.2 苦参碱增强X射线对HepG2细胞克隆形成率影响30-31
• 3.3 HepG2细胞凋亡情况31
• 3.4 不同处理条件下HepG2细胞蛋白表达的影响31-33
• 第四章 讨论33-35
• 结论35-36
• 英文缩写36-37
• 参考文献37-41
• 在学期间的研究成果41-42
• 致谢42

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本文编号：633511