ATF2基因促进肾癌细胞的增殖和转移与临床患者预后相关性的研究

发布时间：2017-08-07 16:08

  本文关键词：ATF2基因促进肾癌细胞的增殖和转移与临床患者预后相关性的研究

  更多相关文章： ATF2 肾细胞癌 基因敲减 增殖 转移 预后

【摘要】：[目的]激活转录因子2(activating transcription factor 2,ATF2)是碱性亮氨酸拉链(basic leucine zipper,b ZIP)家族成员,在不同肿瘤的发生和发展当中,ATF2发挥抑癌和促癌的双重作用。研究报道其在调节参与应激、DNA损伤应答和转录调控基因和蛋白方面均发挥重要作用。然而,在肾脏肿瘤的相关研究中,ATF2的作用鲜有报道。本课题旨在通过抑制ATF2基因的表达,探究其对肾癌细胞系表型的影响,并结合临床资料研究其相关的临床意义。[研究方法]1、通过qRT-PCR(quantitative real-time,PCR)方式验证肾癌细胞系与正常肾脏细胞系,癌旁组织和癌组织,癌组织和癌栓组织中ATF2 mRNA的表达差异。2、构建针对ATF2基因的三条si RNA(small interfering RNA,si RNA)敲减序列,并通过qRT-PCR方式验证其敲减效率从而筛选敲减效率最强的一条序列制备慢病毒介导的ATF2 sh RNA(short hairpin RNA,sh RNA),并再次在mRNA和蛋白水平验证其敲减效率。3、通过细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移和侵袭实验验证ATF2敲减对肾癌细胞系786-O和ACHN的影响。同时利用qRT-PCR和Western blot技术检测影响细胞增殖和转移相关基因的表达。裸鼠皮下荷瘤实验再次验证ATF2敲减对肾癌细胞增殖的影响。4、利用免疫组化和组织芯片技术,探究ATF2在肾癌组织中的表达情况,并结合临床资料研究其对患者生存和预后的意义。[结果]1、qRT-PCR结果表明ATF2 mRNA在肾癌细胞系中的表达高于正常肾脏细胞系,临床样本中结果表明其在癌组织中高表达,且相较于癌组织,癌栓组织中ATF2 mRNA表达水平更高。2、qRT-PCR和Western blot结果表明构建的ATF2 sh RNA能够有效的敲减ATF2在mRNA和蛋白水平的表达,敲减效率在90%以上。3、相较于对照组,ATF2敲减组肾癌细胞在增殖活性,迁移和侵袭能力方面均明显降低。ATF2 sh RNA敲减组细胞凋亡增加,细胞周期出现G0/G1期阻滞。qRT-PCR和Western blot结果显示,ATF2敲减后Cyclin B1,Cyclin D1,Snail和Vimentin基因的表达受到抑制,E-cadherin的表达升高。裸鼠皮下荷瘤实验显示实验组肿瘤生长明显受到抑制。4、组织芯片免疫组化染色结果分析,ATF2在肾癌组织中高表达,ATF2的表达与肾癌患者肿瘤的大小,有无癌栓,有无转移相关。高表达ATF2肾癌患者的总体生存期和无进展生存期明显较短。[结论]慢病毒敲减ATF2使其在mRNA和蛋白水平表达明显受到抑制,ATF2通过调控Cyclin B1,Cyclin D1,Snail,Vimentin和E-cadherin基因的表达影响肾癌细胞的增殖和转移。结合临床资料分析ATF2可能作为判断患者预后的生物学指标。
【关键词】：ATF2 肾细胞癌 基因敲减 增殖 转移 预后
【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.11
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 英文缩略词表10-11
• 前言11-14
• 参考文献12-14
• 第一部分 验证ATF2在肾癌中转录水平的表达和慢病毒载体介导的ATF2 shRNA的构建及验证14-35
• 一、材料14-16
• 二、实验方法16-27
• 三、结果27-32
• 四、讨论32-33
• 五、结论33-34
• 参考文献34-35
• 第二部分 体外和体内实验验证ATF2基因敲减后对人肾癌细胞生物学行为的影响35-61
• 一、材料35-36
• 二、方法36-42
• 三、结果42-57
• 四、讨论57-58
• 五、结论58-59
• 参考文献59-61
• 第三部分 ATF2基因在肾癌组织的表达及与临床预后的相关性分析61-73
• 一、实验材料61-62
• 二、方法62-63
• 三、结果63-71
• 四、讨论71
• 五、结论71-72
• 参考文献72-73
• 文献综述73-84
• 参考文献79-84
• 在读期发表论文和参加科研工作情况说明84-85
• 致谢85

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本文编号：635502