miR-3189-3p和CFL2基因在胃癌细胞MGC803中的作用及其机制研究
发布时间：2024-01-03 13:36
前言:胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤,目前其临床治疗效果仍不理想。因此,阐明胃癌发生发展的分子机制对研发新型治疗靶点、改善胃癌患者预后具有重要意义。S100A4是钙离子结合蛋白S100家族的成员之一,本课题组前期研究已证实S100A4高表达与胃癌细胞的增殖、体外迁移和凋亡等密切相关。GDF15是S100A4下游的重要基因,参与介导S100A4对胃癌细胞增殖、凋亡和干样特性的影响。MiR-3189编码基因位于GDF15基因的内含子内,目前已有研究表明miR-3189-3p在人类不同肿瘤中发挥不同的生物学功能,但在胃癌细胞中的表达状态和功能仍然未见报道。鉴于S100A4可以调控GDF15表达,我们推测S100A4可能也参与调控miR-3189-3p的表达,且miR-3189-3p可能介导S100A4对胃癌细胞MGC803的生物学特性的影响。通过生物信息学软件预测miR-3189-3p下游的靶基因,根据相关表达及功能挑选出CFL2作为候选靶基因。CFL2(cofilin-2)是肌动蛋白结合蛋白ADF/cofilins家族的成员之一。前期研究发现人体中CFL2主要在肌肉组织中表达并参与肌肉的发...
【文章页数】：76 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 ：miR-3189-3p增强S100A4-siRNA对胃癌细胞增殖、迁移和干细胞样特性的抑制作用
1 前言
2 材料和方法
2.1 细胞系
2.2 主要试剂和仪器
2.2.1 主要试剂
2.2.2 主要仪器
2.3 生物信息学网址和计算机分析软件
2.4 实验方法
2.4.1 细胞培养
2.4.2 细胞转染
2.4.3 细胞总RNA提取
2.4.4 反转录实时定量PCR检测mRNA及miRNA表达水平
2.4.5 CCK8细胞增殖实验
2.4.6 Transwell实验
2.4.7 划痕实验
2.4.8 低吸附悬浮培养观察细胞成球能力
2.4.9 软琼脂集落形成实验
2.4.10 统计学分析
3 结果
3.1 S100A4基因沉默抑制胃癌细胞MGC803中miR-3189-3p表达
3.2 MiR-3189-3p抑制胃癌细胞MGC803增殖
3.3 MiR-3189-3p抑制胃癌细胞MGC803迁移
3.4 MiR-3189-3p对胃癌细胞MGC803干样特性的影响
3.5 MiR-3189-3pmimics增强S100A4-siRNA对MGC803细胞增殖、迁移及干样特
4 讨论
第二部分 ：miR-3189-3p靶向CFL2基因影响胃癌细胞MGC803的增殖、迁移和糖酵解
5 前言
6 材料和方法
6.1 细胞系
6.2 主要试剂和仪器
6.2.1 主要试剂
6.2.2 主要仪器
6.3 生物信息学网址和计算机分析软件
6.4 实验方法
6.4.1 细胞培养
6.4.2 细胞转染
6.4.3 细胞总RNA提取
6.4.4 实时定量PCR检测mRNA表达水平
6.4.5 Westernblotting检测细胞中蛋白表达
6.4.6 双荧光素酶报告基因实验
6.4.7 CCK8细胞增殖实验
6.4.8 Transwell实验
6.4.9 划痕实验
6.4.10 生存分析
6.4.11 lactate产量测定
6.4.12 乳酸脱氢酶(LDH)活性测定
6.4.13 统计学分析
7 结果
7.1 CFL2是miR-3189-3p的直接靶基因
7.2 CFL2-siRNA抑制MGC803细胞的增殖和迁移
7.3 CFL2介导miR-3189-3p在胃癌MGC803细胞中的功能效应
7.4 CFL2是胃癌的预后不良因子
7.5 miR-3189-3p抑制胃癌MGC803细胞糖酵解
7.6 miR-3189-3p对胃癌MGC803细胞LDH活性及糖酵解相关基因表达的影响..
7.7 CFL2促进胃癌MGC803细胞糖酵解
7.8 CFL2对胃癌MGC803细胞LDH活性及糖酵解相关基因表达的影响
8 讨论
9 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历
本文编号：3876474
【文章页数】：76 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略语
第一部分 ：miR-3189-3p增强S100A4-siRNA对胃癌细胞增殖、迁移和干细胞样特性的抑制作用
1 前言
2 材料和方法
2.1 细胞系
2.2 主要试剂和仪器
2.2.1 主要试剂
2.2.2 主要仪器
2.3 生物信息学网址和计算机分析软件
2.4 实验方法
2.4.1 细胞培养
2.4.2 细胞转染
2.4.3 细胞总RNA提取
2.4.4 反转录实时定量PCR检测mRNA及miRNA表达水平
2.4.5 CCK8细胞增殖实验
2.4.6 Transwell实验
2.4.7 划痕实验
2.4.8 低吸附悬浮培养观察细胞成球能力
2.4.9 软琼脂集落形成实验
2.4.10 统计学分析
3 结果
3.1 S100A4基因沉默抑制胃癌细胞MGC803中miR-3189-3p表达
3.2 MiR-3189-3p抑制胃癌细胞MGC803增殖
3.3 MiR-3189-3p抑制胃癌细胞MGC803迁移
3.4 MiR-3189-3p对胃癌细胞MGC803干样特性的影响
3.5 MiR-3189-3pmimics增强S100A4-siRNA对MGC803细胞增殖、迁移及干样特
4 讨论
第二部分 ：miR-3189-3p靶向CFL2基因影响胃癌细胞MGC803的增殖、迁移和糖酵解
5 前言
6 材料和方法
6.1 细胞系
6.2 主要试剂和仪器
6.2.1 主要试剂
6.2.2 主要仪器
6.3 生物信息学网址和计算机分析软件
6.4 实验方法
6.4.1 细胞培养
6.4.2 细胞转染
6.4.3 细胞总RNA提取
6.4.4 实时定量PCR检测mRNA表达水平
6.4.5 Westernblotting检测细胞中蛋白表达
6.4.6 双荧光素酶报告基因实验
6.4.7 CCK8细胞增殖实验
6.4.8 Transwell实验
6.4.9 划痕实验
6.4.10 生存分析
6.4.11 lactate产量测定
6.4.12 乳酸脱氢酶(LDH)活性测定
6.4.13 统计学分析
7 结果
7.1 CFL2是miR-3189-3p的直接靶基因
7.2 CFL2-siRNA抑制MGC803细胞的增殖和迁移
7.3 CFL2介导miR-3189-3p在胃癌MGC803细胞中的功能效应
7.4 CFL2是胃癌的预后不良因子
7.5 miR-3189-3p抑制胃癌MGC803细胞糖酵解
7.6 miR-3189-3p对胃癌MGC803细胞LDH活性及糖酵解相关基因表达的影响..
7.7 CFL2促进胃癌MGC803细胞糖酵解
7.8 CFL2对胃癌MGC803细胞LDH活性及糖酵解相关基因表达的影响
8 讨论
9 结论
本研究创新性的自我评价
参考文献
综述
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简历
本文编号：3876474
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