栗疫菌蛋白激发子PECp1基因克隆表达与功能分析

发布时间：2024-03-22 19:31

　　板栗是四大坚果之一,具有重要的经济价值和营养价值。板栗在我国适应性强,分布范围广泛,具有重要的生态价值,也是贫困山区脱贫致富的重要树种。板栗疫病的发生阻碍了板栗的增收增产,严重时造成全株死亡。蛋白激发子能够引发植物的免疫反应,增强植物的抗逆能力,在植物抗病害过程中起着重要作用,目前关于板栗疫病蛋白激发子的研究还未见报道。本文以板栗疫病为研究对象,通过与已知蛋白激发子进行同源性比对,进行栗疫菌蛋白激发子PECp1(Protein elicitor of Cryphonectria parasitica 1)片段的克隆,并进行原核表达,优化其表达条件,并将表达出的蛋白作用于植物种子和幼苗,分析了栗疫菌蛋白激发子的结构,同时也为深入研究该蛋白的功能奠定了理论基础,本研究取得的主要成果如下：1.栗疫菌蛋白激发子PECp1的基因克隆：通过与已知的蛋白激发子进行同源性比对,采用同源克隆,扩增出PECp1的DNA片段,通过RT-PCR扩增出PECp1的cDNA片段,将DNA和cDNA序列进行比对,PECp1的DNA全长824bp,包含两段总长为204bp的内含子,PECp1的cDNA全长618bp,...

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２昨Ｔ－２８ａ质粒幽谱??Ｆｉｇｕｒｅ２?ｐｌａｓｍｉｄ?ｍａｐ?ｏｆ?ｐＥＴ－２８ａ??（３）连接产物验证??

图２昨Ｔ－２８ａ质粒幽谱??Ｆｉｇｕｒｅ２?ｐｌａｓｍｉｄ?ｍａｐ?ｏｆ?ｐＥＴ－２８ａ??３）连接产物验证??．Ｔ７引物验证将上述连接产物按照２．３．４方法转化ＤＨ５ａ（把抗生素换挑取单菌落于５?ｍＬ含Ｋａｎ抗生素的ＬＢ液体中，巧‘Ｃ，?１５０?ｒｍｐ培养１２行菌液ＰＣ民鉴定，....

图３?ＤＮＡ温度梯度ＰＣ民??Ｆｉｇｕｒｅｓ?ＰＣＲ?ｏｆ?ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ?ｇｒａｄｉｅｎｔ?ｏｆ?ＤＮＡ??Ｍ：ｍａｒｋｅｒＤＬ２０００；ｌ：５４．４?ｒ；２：５４．９

与分析??Ａ目的片段扩増??火温度和引物的特异性对ＰＣＲ的结果影响最为显著，采用／＞ｅｗ７－Ｆ－民特异性引物，退火温度５７．４±３’Ｃ做温度梯度ＰＣＲ，结果表明用该引得一条位于７５０ｂｐ－１０００ｂｐ的条带，并且退火溫度越高，特异性越好。??ｂｐ??

图４ＲＮＡ电泳图??Ｆｉｇｕｒｅ４?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｍａｐ?ｏｆ?ＲＮＡ??

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图５ｃＤＮＡ扩增图??Ｆｉｇｕｒｅｓ?ｔｈｅ?ＰＣＲ?ｏｆ?ｃＤＮＡ?（Ｍ：ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ２０００）??将上述ＰＣＲ产物连接到ｐＭＤ１９－Ｔ，挑取单克隆进行菌落ＰＣＲ和测序验证，??

图５ｃＤＮＡ扩增图??Ｆｉｇｕｒｅｓ?ｔｈｅ?ＰＣＲ?ｏｆ?ｃＤＮＡ?（Ｍ：ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ２０００）??述ＰＣＲ产物连接到ｐＭＤ１９－Ｔ，挑取单克隆进行菌落ＰＣＲ和测利用ｆｅｃｐＪ－Ｆ和ｉ＾ｅｃｐＪ－Ｒ引物能够从板栗疫菌中获得长度为６１８ｂ结果为；??ＡＴＧＧＣＣＡＡＣＣＣＴ....

本文编号：3934850