CG8005基因在果蝇睾丸生殖细胞中的功能分析

发布时间：2024-03-23 10:48

　　生殖细胞的自我更新及分化过程对于男性不育及生殖细胞肿瘤的发生至关重要,CG8005基因作为果蝇(Drosophila melanogaster)睾丸生殖干细胞的调控因子之一,其功能机制尚不清楚。为了探讨CG8005基因在果蝇睾丸生殖细胞中的生物学功能,本研究首先通过UAS-gal4系统介导的RNAi途径,驱动果蝇睾丸生殖细胞和包囊细胞中UAS-CG8005 RNAi的表达,观察后代雄性果蝇的生育能力;其次,通过免疫荧光染色方法检测对照组和CG8005 RNAi雄性果蝇睾丸中Vasa、IBI、锌指结构域1蛋白(Zn finger homeodomain 1, Zfh1)、眼缺陷蛋白(eyes absent, Eya)、DE-cad、FasIII以及磷酸化组蛋白H3 (phospho-histone H3, PH3)、TUNEL等表达模式;最后,使用小干扰RNA (siRNA)在果蝇S2细胞中将CG8005基因表达沉默,用PH3检测对照组和CG8005siRNA组中果蝇S2细胞增殖能力,TUNEL及流式凋亡检测技术分析果蝇S2细胞凋亡情况;通过荧光定量PCR检测剪接体亚基的mRNA水平,观...

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【部分图文】：

图3在包囊细胞中敲低CG8005基因对生殖细胞及体细胞的影响

为了探索果蝇睾丸中CG8005基因在包囊细胞中的功能，本研究利用tj-gal4在包囊细胞中敲低CG8005基因。免疫荧光结果显示，对照组睾丸顶部的中心细胞被FasIII抗体识别，而实验组中FasIII信号消失，Zfh1和Eya染色结果显示不存在CySCs和包囊细胞(图3)。....

图4在包囊细胞中敲低CG8005基因对生殖融合体和细胞凋亡影响

运用UAS-gal4系统实现CG8005基因在睾丸中缺失，导致生殖细胞自我更新和分化异常。本研究进一步分析CG8005基因对果蝇S2细胞存活的影响，利用TUNEL免疫荧光技术检测凋亡细胞，结果显示，与对照组相比，siCG8005-2组果蝇S2细胞中TUNEL阳性细胞增加(图6A....

图5在果蝇S2细胞中缺失CG8005基因对细胞增殖能力的影响

精子发生过程中任何障碍最终可能导致男性不育，其中生殖细胞的功能异常对于男性生育能力尤为重要。并且有证据显示，生殖细胞肿瘤患者在年轻的时候存在生育相关问题，提示不育症可能是生殖细胞肿瘤发病的高危因素[17]。图6在果蝇S2细胞中缺失CG8005基因对细胞凋亡水平的影响

图6在果蝇S2细胞中缺失CG8005基因对细胞凋亡水平的影响

图5在果蝇S2细胞中缺失CG8005基因对细胞增殖能力的影响图7CG8005基因沉默对剪接体亚基表达水平的影响

本文编号：3935810