草莓FaWRKY44基因克隆及功能鉴定

发布时间：2024-03-23 18:12

　　草莓(Fragaria×ananassa Duch.)是蔷薇科草莓属多年生草本植物。草莓的果实中含有大量类黄酮物质。花青素为其中主要的类黄酮物质,其保健功能和经济价值均值得重视。研究发现WRKY家族成员拟南芥TTG2和矮牵牛PH3均参与植物体内花青素和原花青素的生物合成。基于Wei和Zhou等对二倍体森林草莓中WRKY家族成员鉴定结果,通过BLAST确定栽培草莓FaWRKY44为拟南芥TTG2与矮牵牛PH3的同源基因,实验证明同源基因FaWRKY44也参与植物体内花青素和原花青素的生物合成。本研究得到以下结论:(1)通过克隆得到FaWRKY44基因的CDS区1407bp,生物信息学分析显示其蛋白的分子量为116.29kD,无信号肽和跨膜结构。通过亚细胞定位确定该基因位于细胞核。克隆得到FaWRKY44启动子序列2000bp,生物信息学分析显示启动子含有响应光、逆境胁迫、植物激素等顺式作用元件。(2)运用荧光定量构建FaWRKY44表达谱,结果如下:该基因在功能叶表达量最高,全红果实中表达量最少;表达量受蓝光抑制;对于低钾、ABA、盐害、干旱、低磷和低温逆境均有规律性表达。(3)原核表达...

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1-1常见的花青素糖苷配基的化学结构[21]

3图1-1常见的花青素糖苷配基的化学结构[21]Fig.1-1Chemicalstructuresofthecommonanthocyanidinaglycons[21]1.2.2花青素的生物合成花青素的合成主要受结构基因和调节基因控制，结构基因即编码类黄酮途径中各种酶类的基因，....

图1-2花青素生物合成途径[24]

4参与花青素生物合成的酶可作为限速酶影响整体合成途径的效率，同时，也可影响整个通路的稳定性。这类可作为限速酶的结构基因主要有PAL、CHS、DFR和ANR等。图1-2花青素生物合成途径[24]Fig.1-2Anthocyaninsbiosyntheticpathway[24]1.....

图1-3WRKY家族的结构域结构和典型WRKY蛋白的工作机制（A）WRKY蛋白的代表性域组织（B）WRKY蛋白的3D结构及其与基因启动子上的W-box的结合[49]

6许多人的发现了WRKY家族新成员甚至新亚科。例如，已发现4个拟南芥WRKY融合其他结构域，一类富含亮氨酸的重复序列N端的域（At4G12020，At5g45050，At5G45260），和一类N末端的BDP1结构域（At1G55600）。图1-3WRKY家族的结构域结构和典型W....

图2-3FaWRKY44原核表达载体重组质粒图：

17处理的草莓样品以及草莓不同时期不同组织的样本的RNA并进行反转录（方法同上）。定量所用仪器采用CFX96（Bio-Rad，USA），引物FaWRKY44q（表1）使用BeaconDesigner8设计。定量体系采用10μL体系：SYBRPremix5μL，上下游引物各0.4μ....

本文编号：3936293