产L-蛋氨酸基因工程菌株的构建

发布时间：2024-03-24 02:37

　　以野生型蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus) EN34为出发菌株,增强胱硫醚γ-合成酶基因(metI)表达,敲除或弱化腺苷蛋氨酸合成酶的编码基因metK,分析这2个基因的改变对蛋氨酸产量的影响。从枯草芽孢杆菌基因组中扩增P43强启动子,连接到pEB03质粒,利用重组连接的方法,将metI从Bacillus cereus EN34扩增重组连接到质粒,构建成pEB03-P43-SD-metI,通过电击转化到Bacillus cereus EN34,获得Bacillus cereusEN34(pEB03-P43-SD-metI)菌株。通过Bacillus cereus EN34扩增metK基因,提取质粒pKVM1以及重组连接等方法,构建出pKVM 1::metK′敲除质粒,将质粒电转化到Bacillus cereusEN34中进行metK交换,再筛选出单交换成功的菌株,最后获得metK弱化成功Bacillus cereus EN34Δ(metK)菌株。经发酵培养基硫源优化分析得出,单独增强metI表达不能提高蛋氨酸产量,产量与出发菌株基本一致;改变metK基因,能提高蛋氨酸产量,但...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验材料
        1.1.1 菌株和质粒
        1.1.2 主要试剂和仪器
        1.1.3 培养基
    1.2 PCR引物设计
    1.3 metI基因加强表达
    1.4 metK基因敲除
    1.5 蛋氨酸产量分析
    1.6 优化培养基成分
2 结果与分析
    2.1 质粒pEB03-P43-SD-metI构建
    2.2 电击转化质粒pEB03-P43-SD-metI
    2.3 构建质粒pKVM1::metK′
    2.4 改变Bacillus cereus EN34 metK基因
    2.5 蛋氨酸产量分析
    2.6 培养条件优化
3 讨论
4 结论



本文编号：3936839