鸟分枝杆菌中耐受表面活性物质相关基因的分离及功能鉴定

发布时间：2024-04-06 17:42

　　为筛选鸟分枝杆菌中耐受表面活性物质的基因并探究其相关功能,以认识鸟分枝杆菌适应肺部环境的杀(抑)菌机制,本研究构建鸟分枝杆菌基因组文库,采用生物活性水平筛选策略从基因组文库中筛选耐受十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate, SDS)的克隆子,运用生物信息学分析该克隆子完整的开放阅读框及其编码蛋白的二级结构特点。将克隆子的全基因序列与pGEX-4T-3表达质粒连接后转化大肠杆菌,构建过表达目的蛋白的重组菌。检测重组菌分别在含SDS、H₂O₂、NaNO₂和GSNO条件环境下的存活率。结果表明成功构建滴度为1.18×10⁴ cfu/mL的鸟分枝杆菌基因组文库,从文库中筛选到一个耐受SDS的基因MAV-4292。生物信息学分析显示,MAV-4292蛋白是一个无信号肽的跨膜蛋白,二级结构以α-螺旋为主。过表达MAV-4292重组菌在2%SDS、5 mmol/L H₂O₂、20 mmol/L NaNO₂和10 mmol/L ...

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【部分图文】：

图1基因组文库克隆子的PCR鉴定

将基因与pGEX-4T-3载体连接后转化E.coliDH5α，挑单菌落培养后提取重组质粒。MAV-4292重组质粒经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切得到大小约为4959bp和450bp的2条区带(图4A)，表明成功构建了pGEX-MAV-4292重组表达质粒。将pGEX-....

图2MAV-4292基因及其编码氨基酸序列

图1基因组文库克隆子的PCR鉴定图3MAV-4292基因序列比对

图3MAV-4292基因序列比对

图2MAV-4292基因及其编码氨基酸序列1.5过表达MAV-4292重组菌对SDS、H2O2、NaNO2和GSNO耐受能力的检测

图4pGEX-4292基因的克隆及在大肠杆菌中的过表达

鸟分枝杆菌属于机会致病菌，主要引起肺部组织的病变。当人体在缺乏正常T细胞免疫时，可受到严重感染。在晚期艾滋病患者中，约70%合并感染鸟分枝杆菌。鸟分枝杆菌与很多致病性分枝杆菌一样，属于胞内寄生菌，能够存活于宿主细胞并进行繁殖(Danelishvilietal.,2007;St....

本文编号：3946965