甜菜BvMTP11基因在大肠杆菌中的镉耐受功能分析

发布时间：2024-04-09 03:43

　　为了研究甜菜BvMTP11基因(LOC104886952)在重金属Cd逆境胁迫过程中的分子功能,明确其在细胞重金属解毒中的作用,本研究将BvMTP11基因构建于E.coli原核表达载体pEASY-Blunt E1上,并将该重组质粒转化到大肠杆菌BL21中。SDS-PAGE电泳表明,通过1 mmol·L^-1 IPTG的诱导,在大肠杆菌总蛋白46 kDa左右的位置上,获得了重组菌表达的his tag-BvMTP11的融合蛋白。当施加0.5 mmol·L^-1的CdCl₂重金属逆境胁迫后,对照菌的生长受到了较为严重的抑制。相反,过量表达BvMTP11蛋白的重组菌表现出了较好的生长状态,并且其体内的镉离子含量也要远低于对照菌。这说明,甜菜BvMTP11基因可以在一定程度上提高E.coli对Cd²⁺的耐受性,并有可能通过对Cd²⁺的转运和富集来解毒重金属对细胞的伤害。研究结果也进一步说明了甜菜BvMTP11在镉逆境胁迫分子机制中发挥着重要作用。

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【部分图文】：

图1甜菜BvMTP11基因的PCR扩增

2结果与分析2.1pEASY-BluntE1-BvMTP11大肠杆菌原核表达载体的构建

图2pEASY-BluntE1-BvMTP11表达载体的鉴定

将PCR产物连接到pEASY-BluntE1Expressionvector上,并转化到Trans1-T1中。挑取Amp阳性克隆培养并进行质粒提取,通过载体上的XbaI位点和目的基因终止子后的XhoI位点进行限制性内切酶酶切鉴定,分别在5610bp和1350bp左右....

图4大肠杆菌在重金属镉逆境下的耐受性分析

2.3镉逆境胁迫下过量表达BvMTP11的大肠杆菌的耐受性分析为了分析甜菜BvMTP11基因在镉逆境下的作用机制,分析了过量表达BvMTP11蛋白的大肠杆菌在重金属镉逆境下的生长情况。将浓度为OD600=0.5的两组待测菌株原液分别稀释10、100、1000和10000倍....

图3SDS-PAGE分析Histag-BvMTP11融合蛋白的诱导表达:(a)pEASY-BluntE1(对照);(b)pEASY-BluntE1-BvMTP11

分别将pEASY-BluntE1对照空载体和重组质粒pEASY-BluntE1-BvMTP11转化到大肠杆菌表达菌株BL21中。加入1mmol·L-1的IPTG于OD600=0.5的菌液中,进行时间梯度诱导融合蛋白表达,结果如图3所示。图3(a)的SDS-PAGE电泳结....

本文编号：3949263