载脂蛋白AI模拟肽D4F对巨噬源性泡沫细胞内质网应激凋亡途径的作用及其机制

发布时间：2020-11-06 08:58

　　 目的 研究载脂蛋白AI（ApoAI）模拟肽D4F对巨噬源性泡沫细胞凋亡和内质网应激（Endoplasmic Reticulum Stress，ERS）-C/EBP同源蛋白（CHOP）信号途径的影响，以探讨其可能的抗动脉粥样硬化（AS）机制。 方法 24只8周龄雄性apoE-/-小鼠，给予高脂（15.8%）高胆固醇（1.25%）饮食两周后，随机分为3组（n=8），分别腹腔注射生理盐水（模型组）、紊乱模拟肽sD4F （1mg/kg·d，sD4F组）和ApoAI模拟肽D4F （1mg/kg·d，D4F组）。同周龄雄性C57BL/6J小鼠给予普通饮食且腹腔注射生理盐水作为正常对照。6周后处死，采用ELISA法检测血清氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）水平，并切取小鼠主动脉根部制备冰冻切片，采用HE染色和油红O染色检测动脉粥样硬化病变及粥样斑块脂质含量，分别采用Masson染色和TUNEL法检测斑块内胶原纤维含量和细胞凋亡情况，用免疫荧光化学方法检测斑块内巨噬细胞标志分子MOMA-2、ERS标志分子CHOP和糖调节蛋白78（GRP78）水平。体外培养RAW264.7巨噬细胞，在不同浓度（0、12.5、25和50mg/L） D4F或50mg/L紊乱模拟肽sD4F预处理1h后，与ox-LDL （100mg/L）共同孵育24h或与5mg/L ERS诱导剂衣霉素（tunicamycin，TM）共同孵育12h。流式细胞仪分析细胞凋亡，分别采用Western blot和实时荧光定量PCR分析CHOP蛋白和mRNA表达情况。 结果 sD4F组与模型组比较各项指标无统计学差异（P0.05）。实验前后各组小鼠体重变化无统计学差异。与正常对照组（3.45±1.53μg/ml）比较，模型组小鼠血清ox-LDL水平（8.90±1.27μg/ml）显著升高，而D4F组ox-LDL水平（6.36±0.34μg/ml）明显降低，较模型组减少25.5%（P﹤0.05）。D4F显著减少主动脉根部病变总面积和脂质阳性区百分比，而增加斑块内胶原纤维含量，分别为模型组的72.3%（P﹤0.05）、59.9%（P﹤0.01）和140%（P﹤0.05）。与模型组比较，D4F组主动脉根部斑块巨噬细胞聚积和细胞凋亡率明显降低，分别为模型组的65.6%（P﹤0.05）和61.2%（P﹤0.01），且ERS标志分子GRP78和促凋亡蛋白CHOP表达显著减少，分别为模型组的68.1%（P﹤0.05）和61.1%（P﹤0.01）。在体外实验中，D4F明显降低ox-LDL所诱导的巨噬细胞凋亡，并下调CHOP蛋白和mRNA表达，且呈浓度依赖性（P0.05或P0.01）。另外，D4F显著减轻ERS诱导剂TM所诱导的巨噬细胞凋亡，并在mRNA和蛋白水平均可抑制CHOP上调，与TM组比较具有统计学意义（P0.05）。结论 ApoAI模拟肽D4F可减轻apoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变内巨噬细胞的聚集，抑制细胞凋亡，其机制可能与抑制CHOP介导的巨噬细胞ERS凋亡途径有关。
【学位单位】：泰山医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2014
【中图分类】：R543.5
【部分图文】：

图 3 D4F 对主动脉根部脂质沉积的影响。A：油红 O 染色各组小鼠主动脉根部切片，放大倍数为×物镜 4。B：各组小鼠主动脉根部脂质阳性区相对定量，以占主动脉根部病变总面积百分比表示。Mean±SD，n=8. ##P < 0.01vs Model 组。D4FModelsD4FB202530ntentoinoraae)#

图 7 D4F 对 ox-LDL 所诱导的巨噬细胞凋亡的影响。Mean±SD，n=4. 对照（con）组比较，*P<0.05，**P<0.01；与 ox-LDL 组比较，#P<0.05，##P<0.Conox-LDLox-LDL+sD4F ox-LDL+D4##*****##

4F对ox-LDL所诱导的巨噬细胞凋亡的影响
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本文编号：2872933