禾谷镰刀菌FgAP-2复合体生物学功能分析

发布时间：2020-04-05 08:14

【摘要】：AP-2复合体广泛存在于真核生物中,以异源四聚体的形式在哺乳动物/植物的网格蛋白介导的质膜囊泡运输中行使生物学功能。然而,AP-2复合体在丝状真菌病原中仍没有被明确的报道过。在本研究中,对小麦赤霉病的病原真菌,即禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)中AP-2复合物进行了鉴定及生物学功能分析。研究表明,FgAP-2复合物在维持禾谷镰刀菌菌丝极性中起着至关重要的作用,FgAP-2复合物任何亚基基因缺失(FgAP2~α,FgAP2~β,FgAP2~σand FgAP2~(mu))都显著影响菌丝的营养生长、分生孢子形态和萌发。同时,FgAP-2复合物对于禾谷镰刀菌的致病性非常重要,特别对于侵染寄主后定殖和扩展功能。FgAP-2复合物在病菌的各个发育阶段普遍表达,但在新生菌丝的亚尖端颈环及隔膜处具有更集中的动态分布。尽管FgAP-2复合物显示出与肌动蛋白斑点相似的动态行为,并在内吞位点积累,但其对于常规的内吞作用是非必需的。实验进一步证明,FgAP-2复合物对于脂质翻转酶FgDnfA和FgDnfB正常的极性定位至关重要。综上所述,FgAP-2作为货物特异性衔接器调控禾谷镰刀菌的极性生长和侵染寄主后的定殖能力。
【图文】：

17图 1AP-2 蛋白复合体所有亚基的蛋白结构域和系统进化树分析Fig. 1 Protein domains and phylogenetic tree analyses of all subunits of the AP-2 complex.The cartoons depict the protein domains of the AP-2 complex each subunit in the fungi(Aspergillus nidulans, Magnaporthe oryzae, Neurospora crassa, Saccharomyces cerevisiae orSchizosaccharomyces pombe), plants (Arabidopsis thaliana) and mammals (Homo sapiens).A. The protein domains of the AP-2 complex α subunit. The subunits contain N-terminal adaptindomain (pfam01602, ~570 amino acids). The numbers 1 and 2 stand for Alpha_adaptin C2(smart00809, ~103 amion acids) and Alpha_adaptin_C (pfam02296, ~ 112 amion acids),respectively. The phylogenetic tree was reconstructed using Neighbor-Joining and bootstrapmethods.The branch scale used was 0.1 and the branch lengths reflect the expected number ofsubstitutions per site.

19图 2 FgAP-2 复合体靶标基因的 Southern blot 分析Fig. 2 Southern blot analyses of FgAP-2 complex targeted gGenomic DNAs were extracted from the wild type strain PH-1 and putative were digested with the indicated restriction enzymes and gel fractionated.probes were used for mutant screening and identification.A. Targeted deletion of FgAP2α. NcoI-digested genomic DNAs showed a 3.20and a 2.419 kb band in the mutant.B. Targeted deletion of FgAP2β. EcoRV-digested DNAs showed a 2.314kb b3.108kb band in the mutant.C. Targeted gene deletion of FgAP2mu. NcoI-digested DNAs showed a 3.71and a 2.380kb band in the mutant.D. Targeted deletion of FgAP2σ. XhoI-digested genomic DNAs showed a 1.4a 3.789 kb band in the mutant.
【学位授予单位】：福建农林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S435.121.45

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本文编号：2614769