长足大竹象性信息素结合蛋白PBP1的克
发布时间：2021-02-08 03:11
昆虫嗅觉系统作为昆虫进行觅食、寻偶、交配等一系列生命活动的化学监测器,能特异的识别环境中的信息化学物质。长足大竹象（Cvrtotrachelusbuqueti）是我国南方重要的钻蛀性林业害虫,危害多种丛生竹类,严重影响竹类产业发展。在昆虫世代繁衍过程中,雌雄个体间如何通过嗅觉系统远距离精确搜索定位成为雌雄个体间是否有效交流的关键。本文根据前期高通量测序筛选序列,利用RT-PCR技术成功克隆得到长足大竹象的一个性信息素结合蛋白基因,利用SYBR Green Ⅰ荧光染料法,采用荧光定量PCR（quantitative PCR,qPCR）分析了CbuqPBP 在雌雄成虫不同组织中的转录表达谱,并进行表达纯化,运用荧光竞争结合技术对该蛋白与主要虫体挥发物和寄主挥发物等的结合特性进行分析,初步探讨了该蛋白的功能。主要研究结果如下:1.根据前期高通量测序结果（GenBanknumber:SAMN06176790）筛选设计引物,运用RT-PCR技术克隆得到长足大竹象性信息素结合蛋白PBP1基因（Genebank登录号为KU845733.1）,编码143个氨基酸,N-末端包含17个氨基酸,预测为信号肽...
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１昆虫嗅觉感器的结构组成??Ｆｉｇ．?１?Ｇｅｎｅｒａｌ?ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ａｎ?ｉｎｓｅｃｔ?ｏｌｆａｃｔｏｒｙ?ｓｅｎｓｉｌｈｉｍ｜－?’１??
维持其三维结构的稳定性，ａｌ，〇５，?ａ６和ａ４反向平行组成一个可以特异结合信息素??的烧瓶状（ｆｉａｓｋ）的结合兜，其一端被ａ３螺旋覆盖（己被２个二硫键固定），另一??端则因为螺旋紧缩而变窄［６５］（如图２所示）。在后来的研宄中，龚达平等［４７］也有相??同的发现，家蚕的５个氨基酸序列（ＰＢＰ１、ＰＢＰ２、ＰＢＰ３、Ｇ０ＢＰ１和ＧＯＢＰ２）每个??５??
对扩增出的长足大竹象ＰＢＰ基因片段进行割胶回收后，与ｐＭＤ?Ｔ－】９?ｖｅｃｔｏｒ克隆??载体进行连接，并转化入Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ａ感受态细胞，通过蓝白斑筛选，随机挑取８个??白斑进行菌落ＰＣＲ鉴定，鉴定结果均为阳性克隆（图５）。??］?２?３?４?５?６?７?８?Ｍａｒｋｅｒ??■?ｈｐ??２０００??１０００??ＩＳ??图５菌落ＰＣＲ鉴定结果??Ｆｉｇ．５?Ｔｈｅ?ＰＣＲ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｃｏｌｏｎｙ??１－８泳道：８个白斑菌落ＰＣＲ结果；９泳道：标准分子量（从左向右）??Ｌａｎｅ?１－８：?Ｔｈｅ?ＰＣＲ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｅｉｇｈｔ?ｗｈｉｔｅ?ｃｏｌｏｎｉｅｓ；?ｌａｎｅ?９：?Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｗｅｉｇｈｔ?ｍａｒｋｅｒ?（ｆｒｏｍ?ｌｅｆｔ?ｔｏ??ｒｉｇｈｔ）??２８??
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于新一代测序技术的昆虫转录组学研究进展[J]. 张棋麟,袁明龙. 昆虫学报. 2013(12)
[2]玉米螟性信息素田间诱捕玉米螟的应用研究[J]. 梁霆,周舒扬,孙宇峰,殷博. 北京农业. 2013(09)
[3]赣南丛生竹重要害虫的发生及其生态控制对策[J]. 廖忠明,李滋仁,郭晓敏. 湖北农业科学. 2013(04)
[4]长足大竹象成虫体表信息化学物质的提取和鉴定[J]. 忙定泽,罗庆怀,舒敏,韦卫. 昆虫学报. 2012(03)
[5]高通量测序技术在动植物研究领域中的应用[J]. 岳桂东,高强,罗龙海,王军一,许姣卉,尹烨. 中国科学:生命科学. 2012(02)
[6]象甲科昆虫信息素研究概况[J]. 杨毅,梁潇予,杨春平,杨桦,杨伟. 浙江农林大学学报. 2012(01)
[7]烟夜蛾性信息素结合蛋白2（PBP2）基因的克隆、序列分析与时空表达[J]. 李亮,杨文玲,郭线茹,罗梅浩,原国辉,乔奇,付晓伟. 昆虫学报. 2009(11)
[8]棉铃虫信息素结合蛋白2 cDNA的克隆、表达与组织特异性表达[J]. 张帅,张永军,苏宏华,高希武,郭予元. 中国农业科学. 2009(07)
[9]性诱剂防治冬枣桃小食心虫[J]. 张利华. 河北林业. 2009(02)
[10]云南木蠹象雌雄虫气味化合物比较分析[J]. 王超英,杨燕,刘正忠,郑红军,杨茂发,闫凤鸣. 河南农业大学学报. 2008(04)
博士论文
[1]泥蚶高通量转录组分析及生长相关基因的克隆与表达研究[D]. 董迎辉.中国海洋大学 2012
[2]绿盲蝽（Apolygus lucorum）性信息素的提取鉴定及应用研究[D]. 张涛.中国农业科学院 2011
[3]家蚕气味结合蛋白基因的研究[D]. 张升祥.山东农业大学 2009
硕士论文
[1]苹果蠢蛾成虫触角感器超微结构及信息素结合蛋白基因的克隆与序列分析[D]. 赵骁.西北农林科技大学 2012
[2]象鼻虫性信息素中间体的合成与氧化端位羟基酰胺为环酰亚胺的反应研究[D]. 杨艳艳.天津大学 2012
[3]草地螟普通气味分子结合蛋白的组织特异表达及结合特性分析[D]. 孙红岩.吉林大学 2011
[4]草地螟触角气味结合蛋白基因克隆及表达[D]. 钟涛.西南大学 2008
本文编号：3023278
【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校
【文章页数】：68 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１昆虫嗅觉感器的结构组成??Ｆｉｇ．?１?Ｇｅｎｅｒａｌ?ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ?ｏｆ?ａｎ?ｉｎｓｅｃｔ?ｏｌｆａｃｔｏｒｙ?ｓｅｎｓｉｌｈｉｍ｜－?’１??
维持其三维结构的稳定性，ａｌ，〇５，?ａ６和ａ４反向平行组成一个可以特异结合信息素??的烧瓶状（ｆｉａｓｋ）的结合兜，其一端被ａ３螺旋覆盖（己被２个二硫键固定），另一??端则因为螺旋紧缩而变窄［６５］（如图２所示）。在后来的研宄中，龚达平等［４７］也有相??同的发现，家蚕的５个氨基酸序列（ＰＢＰ１、ＰＢＰ２、ＰＢＰ３、Ｇ０ＢＰ１和ＧＯＢＰ２）每个??５??
对扩增出的长足大竹象ＰＢＰ基因片段进行割胶回收后，与ｐＭＤ?Ｔ－】９?ｖｅｃｔｏｒ克隆??载体进行连接，并转化入Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ａ感受态细胞，通过蓝白斑筛选，随机挑取８个??白斑进行菌落ＰＣＲ鉴定，鉴定结果均为阳性克隆（图５）。??］?２?３?４?５?６?７?８?Ｍａｒｋｅｒ??■?ｈｐ??２０００??１０００??ＩＳ??图５菌落ＰＣＲ鉴定结果??Ｆｉｇ．５?Ｔｈｅ?ＰＣＲ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｃｏｌｏｎｙ??１－８泳道：８个白斑菌落ＰＣＲ结果；９泳道：标准分子量（从左向右）??Ｌａｎｅ?１－８：?Ｔｈｅ?ＰＣＲ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｅｉｇｈｔ?ｗｈｉｔｅ?ｃｏｌｏｎｉｅｓ；?ｌａｎｅ?９：?Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｗｅｉｇｈｔ?ｍａｒｋｅｒ?（ｆｒｏｍ?ｌｅｆｔ?ｔｏ??ｒｉｇｈｔ）??２８??
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于新一代测序技术的昆虫转录组学研究进展[J]. 张棋麟,袁明龙. 昆虫学报. 2013(12)
[2]玉米螟性信息素田间诱捕玉米螟的应用研究[J]. 梁霆,周舒扬,孙宇峰,殷博. 北京农业. 2013(09)
[3]赣南丛生竹重要害虫的发生及其生态控制对策[J]. 廖忠明,李滋仁,郭晓敏. 湖北农业科学. 2013(04)
[4]长足大竹象成虫体表信息化学物质的提取和鉴定[J]. 忙定泽,罗庆怀,舒敏,韦卫. 昆虫学报. 2012(03)
[5]高通量测序技术在动植物研究领域中的应用[J]. 岳桂东,高强,罗龙海,王军一,许姣卉,尹烨. 中国科学:生命科学. 2012(02)
[6]象甲科昆虫信息素研究概况[J]. 杨毅,梁潇予,杨春平,杨桦,杨伟. 浙江农林大学学报. 2012(01)
[7]烟夜蛾性信息素结合蛋白2（PBP2）基因的克隆、序列分析与时空表达[J]. 李亮,杨文玲,郭线茹,罗梅浩,原国辉,乔奇,付晓伟. 昆虫学报. 2009(11)
[8]棉铃虫信息素结合蛋白2 cDNA的克隆、表达与组织特异性表达[J]. 张帅,张永军,苏宏华,高希武,郭予元. 中国农业科学. 2009(07)
[9]性诱剂防治冬枣桃小食心虫[J]. 张利华. 河北林业. 2009(02)
[10]云南木蠹象雌雄虫气味化合物比较分析[J]. 王超英,杨燕,刘正忠,郑红军,杨茂发,闫凤鸣. 河南农业大学学报. 2008(04)
博士论文
[1]泥蚶高通量转录组分析及生长相关基因的克隆与表达研究[D]. 董迎辉.中国海洋大学 2012
[2]绿盲蝽（Apolygus lucorum）性信息素的提取鉴定及应用研究[D]. 张涛.中国农业科学院 2011
[3]家蚕气味结合蛋白基因的研究[D]. 张升祥.山东农业大学 2009
硕士论文
[1]苹果蠢蛾成虫触角感器超微结构及信息素结合蛋白基因的克隆与序列分析[D]. 赵骁.西北农林科技大学 2012
[2]象鼻虫性信息素中间体的合成与氧化端位羟基酰胺为环酰亚胺的反应研究[D]. 杨艳艳.天津大学 2012
[3]草地螟普通气味分子结合蛋白的组织特异表达及结合特性分析[D]. 孙红岩.吉林大学 2011
[4]草地螟触角气味结合蛋白基因克隆及表达[D]. 钟涛.西南大学 2008
本文编号：3023278
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/lylw/3023278.html
