黑曲霉低聚葡萄糖氧化酶的分子克隆与生化特征

发布时间：2021-12-18 20:51

　　低聚葡萄糖氧化酶能够氧化低聚葡萄糖末端残基生成相应的低聚糖酸,在低聚糖酸的制备、食品、化工等方面具有潜在的应用价值。从黑曲霉基因组中发现1个疑似编码低聚葡萄糖氧化酶开放读框,共编码473个氨基酸序列,包含2个保守结构域（FAD结合域和黄素结构域）和4个活性位点（His80、Cys141、Asp377和Try428）;在毕赤酵母中表达的重组酶蛋白大小为61 kDa,比酶活0.33 U/mg。重组酶的最适作用温度和pH值分别为75℃和9.0;在55～85℃和pH 5.0～9.0范围内孵育4 h,仍能保持70%以上的酶活;Mn²⁺和Fe³⁺分别对酶活具有最强的激活和抑制作用。该酶的K_m和V_max为0.48 mmol/L和2.22μmol/（L·min）,对麦芽三糖、麦芽四糖和麦芽五糖具有相对较高酶活。 

【文章来源】：食品与发酵工业. 2020,46(01)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

pH对AnGoox的酶活和pH稳定性的影响

以不同浓度(1、5、10、15、20 mmol/L)的乳糖为底物,在最适温度和pH条件下测定酶活,采用双倒数法,绘制AnGoox的动力学曲线,如图5所示,求得AnGoox的Km值为0.48 mmol/L,Vmax为2.22 μmol/(L·min)。该酶的Km高于Paraconiothyrium sp. 的Goox(0.11 mmol/L)[13]和S. strictum的Goox(0.066 mmol/L)[18],说明AnGoox对乳糖底物的亲和力低于前期报道的2种酶。2.4.5 底物特异性研究

根据现有报道的Goox序列Goox-vn和Goox-T1,利用NCBI数据库,对黑曲霉基因组序列进行分析发现,黑曲霉基因组中存在一个疑似goox的开放读框,进一步对来源于黑曲霉的Goox(命名为AnGoox)和Goox-vn、Goox-T1进行序列比对,结果如图1所示。AnGoox与Goox-vn和Goox-T1的相似度分别为28.98%和28.71%。在它们的氨基酸序列中,都包含2个较为保守的结构域,一段位置在37～174之间,长度为137的FAD结合域,其起始基序为(PAAI)。另一段在结尾处长度约为44的黄素结构域。通过氨基酸序列比对,可知与FAD进行双共价连接的关键氨基酸残基为His80和Cys141。参与反应的关键氨基酸残基为Asp377和Try428,2个氨基酸引发底物的氢离子的转移,从而降低FAD辅因子能量。

【参考文献】：
期刊论文
[1]乳糖酸的研究进展[J]. 白会钗,缪铭,江波,沐万孟,张涛.  食品工业科技. 2012(02)



本文编号：3543148