罗伊氏乳杆菌J1益生特性初步评价及基因组学研究

发布时间：2021-12-23 14:32

　　罗伊氏乳杆菌（Lactobacillus reuteri）是一种性能良好的乳酸菌,广泛应用于功能性食品的开发中。该菌株具有多种益生功能,其中罗伊氏乳杆菌对机体的免疫调节功能受到了广泛关注。在菌株特性的评价过程中,传统的评价方法多以生化试验为基础,但随着全基因组测序技术的成熟,研究者可从生物信息角度在微生物基因结构的基础上,探索微生物的生物学功能,大大推进了乳酸菌研究的发展。由于乳酸菌具有菌株特异性,因此,本研究将体外试验与基因组学相结合对罗伊氏乳杆菌J1的免疫功能和分子生物学信息进行研究,为揭示罗伊氏乳杆菌益生机理以及遗传特性奠定基础。本研究以罗伊氏乳杆菌J1（L.reuteri J1）为研究对象,该菌株分离自传统发酵乳制品,对其黏附能力、胃肠道耐受性、抑菌能力以及免疫调节功能等益生特性进行初步评价,进一步利用全基因组测序技术对其进行基因组组分分析和比较基因组研究,挖掘该菌株的遗传基础。通过上述研究,得到以下研究结果:（1）罗伊氏乳杆菌J1具有较强的黏附能力。其黏附数为867±88.0 CFU/100Caco-2 Cells,黏附率可达87.93%,与试验中的对照菌株相比,该菌株具备较... 

【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

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摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 罗伊氏乳杆菌介绍
        1.1.1 罗伊氏乳杆菌基本特性
        1.1.2 罗伊氏乳杆菌的益生功能
        1.1.3 罗伊氏乳杆菌的应用
    1.2 免疫功能
        1.2.1 乳酸菌对免疫的影响
        1.2.2 乳酸菌的免疫调节成分
        1.2.3 罗伊氏乳杆菌的免疫作用
    1.3 基因组测序技术与比较基因组
        1.3.1 基因组测序技术简介
        1.3.2 基因组测序技术在乳酸菌中的应用
        1.3.3 比较基因组在乳酸菌中的应用
    1.4 研究的目的与意义
    1.5 研究内容
2 材料与方法
    2.1 材料与仪器
        2.1.1 试验菌株及细胞
        2.1.2 主要生化试剂
        2.1.3 主要仪器与设备
        2.1.4 主要溶液的配制
    2.2 试验方法
        2.2.1 菌株活化与保藏
        2.2.2 菌株鉴定
        2.2.3 黏附能力评价
        2.2.4 生长曲线及胃肠道耐受性试验
        2.2.5 抑菌能力评价
        2.2.6 免疫相关基因表达研究
        2.2.7 数据与图像分析
        2.2.8 罗伊氏乳杆菌J1 全基因组测序
        2.2.9 免疫功能基因挖掘
        2.2.10 比较基因组学分析
    3.结果与分析
        3.1 菌株鉴定
            3.1.1 形态学观察
            3.1.2 SEM观测结果分析
            3.1.3 16S rDNA鉴定
        3.2 罗伊氏乳杆菌J1 黏附能力评价
            3.2.1 Caco-2 细胞的培养
            3.2.2 黏附能力评价
        3.3 罗伊氏乳杆菌J1 收获期的确定及胃肠道耐受性评价
            3.3.1 收获期的确定
            3.3.2 耐酸性评价
            3.3.3 耐胆盐评价
            3.3.4 耐人工胃肠液评价
            3.3.5 耐盐性评价
        3.4 罗伊氏乳杆菌抑菌能力的测定
        3.5 免疫相关基因表达的体外评价
            3.5.1 RNA完整性和纯度检测
            3.5.2 免疫相关基因表达量动态变化
        3.6 基因组测序质量分析
        3.7 罗伊氏乳杆菌J1 基因组特征分析
            3.7.1 基因组的基本特点
            3.7.2 基因组基因预测及功能注释
            3.7.3 基因组组分分析
            3.7.4 免疫功能基因挖掘
        3.8 比较基因组分析
            3.8.1 泛基因与核心基因分析
            3.8.2 基因进化分析
            3.8.3 平均核苷酸一致性分析
4 讨论
    4.1 黏附能力评价
    4.2 环境耐受性评价
        4.2.1 酸耐受性评价
        4.2.2 胆盐耐受性评价
        4.2.3 人工胃肠液耐受性评价
        4.2.4 盐耐受性评价
    4.3 抑菌能力分析
        4.3.1 发酵上清液抑菌能力分析
        4.3.2 甘油发酵液抑菌能力分析
    4.4 免疫相关基因表达分析
    4.5 基因组特点分析
    4.6 免疫功能基因分析
    4.7 比较基因组学分析
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]趋化因子CCL20、SDF-1在大肠癌中的表达及其与淋巴结及肝脏转移的关系[J]. 陈志京,廖山婴,吴伍林,赖晓嵘,林焕建.  广东医学. 2018(17)
[2]Caco-2细胞培养、细胞单层模型建立的研究[J]. 雷艳青,李焕德.  临床合理用药杂志. 2018(20)
[3]一株罗伊氏乳杆菌的分离鉴定及其益生性能研究[J]. 杜志琳,尹望,李雪平.  饲料研究. 2017(11)
[4]嗜铅乳酸菌JT1传代培养稳定性研究[J]. 朱凤,都启晶,满兆红,王玉燕,赵宏坤.  粮油食品科技. 2016(05)
[5]干酪乳杆菌对细菌性肠炎NF-κB通路及其介导的炎性介质的影响[J]. 潘娜,王开,齐宇,伊淑帅,胡桂学.  中国预防兽医学报. 2016(09)
[6]罗伊氏乳杆菌的益生特性及安全性分析[J]. 朱振军,黄国宏,梁晓琳,蔡达,梁爱红,李全阳.  现代食品科技. 2016(06)
[7]3株罗伊氏乳杆菌生物学特性的分析比较[J]. 李文静,梁运祥,赵述淼.  微生物学通报. 2016(05)
[8]罗伊氏乳杆菌体外抑菌和免疫调节性能的研究[J]. 池海波,李烨.  中国乳品工业. 2015(12)
[9]细菌磷壁酸的免疫调控作用及与其结构的关系[J]. 高权新,彭士明,张晨捷,姚震,张慧,施兆鸿.  动物营养学报. 2016(01)
[10]东北粘豆包中一株罗伊氏乳杆菌的分离、鉴定与益生性质研究[J]. 孙大庆,李洪飞,杨健,张丽萍.  黑龙江八一农垦大学学报. 2015(05)

博士论文
[1]罗伊氏乳杆菌全基因组序列分析及其调节仔猪肠黏膜免疫功能的研究[D]. 侯成立.中国农业大学 2015
[2]植物乳杆菌ST-Ⅲ全基因组序列分析及其对低聚果糖代谢通路的解析[D]. 陈臣.江南大学 2014

硕士论文
[1]麦芽糊精促进Lactobacillus plantarum Lp-115胆盐耐受性及相关酶学性质的研究[D]. 王建琴.华东理工大学 2018
[2]2株溶血不动杆菌全基因组测序及生物信息学分析[D]. 宋程程.天津大学 2016
[3]脂磷壁酸在植物乳杆菌免疫调节过程中的作用研究[D]. 初佳丽.山东农业大学 2014
[4]猪源罗伊氏乳杆菌的筛选、特性研究及应用[D]. 王巧丽.甘肃农业大学 2013
[5]产细菌素植物乳杆菌的初探及其应用[D]. 王小娜.浙江工商大学 2011
[6]罗伊氏乳杆菌生物学特性及功能性发酵乳的研究[D]. 李正华.江南大学 2008



本文编号：3548654