VPS4B调控Notch通路对促进牙髓干细胞成牙本质分化的机制研究

发布时间：2022-01-25 14:00

　　目的探讨细胞液泡分选蛋白4B（VPS4B）对人牙髓干细胞（h DPSCs）成牙本质分化及Notch通路的影响。方法 h DPSCs分正常组、矿化组、阴性对照组、VPS4B-siRNA组,除正常组（正常培养,不做任何处理）外,其余各组添加矿化液（0.785 g/L地塞米松、0.05 g/L维生素、2.16 g/Lβ-甘油磷酸钠）,同时阴性对照组和VPS4BsiRNA组均用脂质体Lipofectamine 2000分别和阴性对照siRNA、VPS4B-siRNA共转染。CCK8检测细胞增殖情况;蛋白免疫印迹检测细胞中VPS4B、Notch受体释放其胞内结构域（NICD）、hairy相关转录因子1（Hey1）蛋白水平;茜素红染色观察细胞矿化情况;钙浓度检测试剂盒检测细胞钙浓度;实时荧光定量PCR检测细胞Runx2、骨桥蛋白（OPN）、牙本质涎磷蛋白（DSPP） mRNA水平。结果正常组茜素红染色较浅,面积较小;矿化组、阴性对照组染色较深,且面积较大; VPS4B-siRNA组染色颜色有所减轻,面积减少。与正常组相比,矿化组、阴性对照组OD450水平,NICD、Hey1蛋白水平降低（P<... 

【文章来源】：中国比较医学杂志. 2020,30(12)北大核心

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

4组细胞中VPS4B蛋白表达情况

与正常组相比，矿化组、阴性对照组钙浓度升高(P<0.05);分别与矿化组、阴性对照组相比，VPS4B-siRNA组钙浓度降低(P<0.05)。见表4。2.5 干扰VPS4B对h DPSCs中Runx2、OPN、DSPP mRNA水平的影响

Runx2具有多个结合位点，可以结合在靶基因的启动子上从而调控众多成骨相关的靶基因，如骨钙素、OPN等，影响细胞分化;增强Runx2表达可促进h DPSCs分化为成牙本质细胞[11-12]。OPN可结合羟基磷灰石晶体从而参与钙离子信号传导过程，在初期矿化中起重要作用;DSPP作为牙本质特异性蛋白，其水平反映h DPSCs成牙本质分化水平[13-14]。本研究发现，与正常组相比，矿化组Runx2、OPN、DSPP mRNA水平升高，提示Runx2促进参与矿化过程中的OPN和形成牙本质的相关基因水平升高，促进h DPSCs牙本质分化。与矿化组相比，VPS4B-siRNA组Runx2、OPN、DSPP mRNA水平降低，提示干扰VPS4B后Runx2水平降低，对OPN的促进作用减弱，导致牙本质分化相关基因如DSPP等水平降低，h DPSCs牙本质分化能力减弱。图4 4组细胞中NICD、Hey1蛋白表达情况

【参考文献】：
期刊论文
[1]骨髓间充质干细胞调节Notch表达可有效治疗放射性唾液腺损伤[J]. 罗孟亚男,赵娜,戢楠楠,王武峰.  中国组织工程研究. 2019(25)
[2]超表达Notch胞内结构域对人牙周膜干细胞增殖及成骨分化的影响[J]. 邱申彩,龙晏,陈晓燕,舍玉秀,吴佩玲.  中华口腔医学杂志. 2019 (05)
[3]COX-2基因对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞生长及Notch信号通路的影响及其作用机制[J]. 郭彩霞,于洪涛,石红梅,商玉立.  中国比较医学杂志. 2019(03)
[4]Yes相关蛋白1和胶原三股螺旋重复蛋白1在三阴性乳腺癌中的表达及其与E-钙黏蛋白表达的相关性[J]. 薄剑波,邵志翔,蔺广荣.  肿瘤研究与临床. 2019 (01)
[5]长爪沙鼠脑缺血模型近交系的培育及其发病机制研究进展[J]. 李长龙,杜小燕,王冬平,陈振文.  中国实验动物学报. 2018(04)
[6]过表达NICD通过下调基因JunB的表达抑制BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化[J]. 王南,谭涛,林端阳,罗小辑.  重庆医科大学学报. 2018(10)
[7]干扰VPS4B表达对肝癌细胞增殖和细胞周期的影响[J]. 陈昱延,周一凡,蒋大伟,刘国梁,魏郦娴,陆翠华.  南通大学学报(医学版). 2016(01)
[8]CCN2对人牙髓干细胞增殖及分化的影响[J]. 王军强,曹伟靖.  中国医药导报. 2014(16)



本文编号：3608664