盐藻胞质型3-磷酸甘油脱氢酶基因的克隆及性质鉴定

发布时间：2022-04-17 17:40

　　3-磷酸甘油脱氢酶（GPDH）是盐藻（Dunaliella salina）甘油合成途径上的关键酶,本研究首次报道了一条胞质型GPDH基因的克隆（命名为Ds GPDH1）,经大肠杆菌表达和融合蛋白的纯化及性质鉴定,也研究了在盐胁迫期间DsGPDH1和DsGPDH2的表达变化。研究发现DsGPDH1和DsGPDH2相比,少了一段信号肽序列,但包含完整的SerB结构域和GPDH结构域。通过大肠杆菌制备的融合DsGPDH1蛋白高度可溶,但却没有NADH依赖的脱氢酶活性,其SerB结构域是否具有磷酸化酶的活性还没有研究清楚。在高盐胁迫时DsGPDH1和DsGPDH2都表现出诱导性高表达,在低盐胁迫时,DsGPDH1的表达被高度抑制,但DsGPDH2的表达变化却不太明显。GPDH同工酶在盐藻甘油合成中的具体分工仍然不清楚,但本研究迈出了坚实的一步。 

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【部分图文】：

Ds GPDH1的启动子区

Ds GPDH1和Ds GPDH2的比较

对于3"RACE，使用Oligo-d T引物(Ta Ka Ra)进行c DNA第一条链的合成，用以下基因特异性引物进行Ds GPDH1 c DNA的3"末端的PCR扩增：3RPs1 (5"-C TCTGGCAACTTGGAAGAGGTGGC-"3),3RPs2 (实际为Est Ps)(5"-CAAGGTCAAGCGAGATGCC-3")和3 sites Adaptor primers (Ta Ka Ra公司)(Ta Ka Ra)。采用c DNA为模版，使用引物3RPs1和3sites Adaptor inner primer进行第一轮PCR扩增；第一轮的扩增产物以1∶100的比例稀释后用作第二轮PCR扩增的模版，并用引物3RPs2和3sites Adaptor inner primer进行第二轮扩增。扩增片段克隆至p MD18-T载体，并送出测序。图4 Ds GPDH1和Ds GPDH2的胁迫诱导表达


本文编号：3646023