鸽子DHX36解旋酶表达纯化及酶学特性分析

发布时间：2022-07-27 15:57

　　利用生物化学与生物物理学前沿技术系统地分析了鸽子（Columba livia）DHX36解旋酶的酶学特性。通过原核表达纯化系统获得了纯度大于95%的ClDHX36蛋白。利用荧光各向异性法研究ClDHX36的底物结合偏好性,结果表明ClDHX36偏好结合ssRNA、ssDNA和G4,并且优先结合序列中富含鸟嘌呤的ssDNA。通过快速停留光谱技术探索ClDHX36的解旋活性,明确了ClDHX36解旋方向性为3′-5′,更倾向于解旋尾链为Grich和G4的dsDNA底物,且ClDHX36的解旋活性与底物的尾链长度呈负相关性。本研究揭示了ClDHX36在结合和解旋底物过程中均具有明显的底物偏好性,为深入研究DHX36的工作机理提供参考。 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 底物制备
    1.3 ClDHX36表达载体的构建
    1.4 ClDHX36蛋白的诱导表达与纯化
    1.5 ClDHX36的底物结合偏好性测定
    1.6 ClDHX36的底物解旋偏好性测定
2 结果与分析
    2.1 ClDHX36载体构建和蛋白表达纯化
    2.2 ClDHX36对底物结构的结合偏好性分析
    2.3 ClDHX36对底物序列的结合偏好性分析
    2.4 ClDHX36的解旋方向性及解旋偏好性分析
3 讨论



本文编号：3665751