星形胶质细胞来源的GJA1-20k在氧化应激后参与神经元保护作用的机制

发布时间：2022-07-27 17:56

　　目的:观察星形胶质细胞（astrocyte）通过上调神经元（neuron）内源性缝隙连接蛋白α1截短单体-20k（gap junction protein alpha 1 truncated monomer-20k,GJA1-20k）参与氧化应激损伤后神经保护作用的机制。方法:采用C57BL/6胎鼠以原代培养法获取神经元及星形胶质细胞,建立共培养模型,给予神经元过氧化氢（H2O2）损伤,及星形胶质细胞胰岛素样生长因子1（insulin-like growth factor-1,IGF-1）受体阻滞剂AG1024,分别设立Neuron组、Neuron+Stress组、Neuron+Astrocyte+Stress组及Neuron+Astrocyte+Stress+AG1024组,通过Western blot测定神经元GJA1-20k、去磷酸化（non-phosphorylated,NP）-Cx43的表达,谷氨酸转运酶（glutamate transporter-1,GLT-1）、线粒体功能相关蛋白（PGC-1α、mtTFA、Tom20、CoxⅣ）、凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、Cas... 

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 原代细胞的获取及共培养细胞模型的建立
        1.2.2 实验分组
        1.2.3 Western blot实验
        1.2.4 ELFA、ELISA法
        1.2.5 Annexin V-FITC/PI法测定神经元凋亡
    1.3 统计学方法
2 结果
    2.1 星形胶质细胞共培养能显著升高神经元内GJA1-20k和NP-Cx43表达，且与IGF-1相关
    2.2 星形胶质细胞共培养能显著升高神经元内兴奋性氨基酸转运蛋白GLT-1表达，且与IGF-1相关
    2.3 星形胶质细胞共培养能显著升高神经元线粒体功能相关蛋白的表达，且与IGF-1相关
    2.4 星形胶质细胞共培养能明显上调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达，下调神经元内凋亡促进蛋白Bax、Caspases-9的表达，且与IGF-1相关
    2.5 星形胶质细胞共培养可明显抑制NAPDH氧化酶活性，且与IGF-1相关
    2.6 星形胶质细胞共培养可明显降低神经元炎性代谢产物的表达，且与IGF-1相关
    2.7 星形胶质细胞共培养可明显降低神经元的凋亡率，且与IGF-1相关
3 讨论



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