草鱼IRF5与IRF3协同上调IFN转录的研究

发布时间：2022-08-02 21:57

　　相干扰素调节因子（IRFs）,是一类与先天免疫相关的转录因子家族,参与干扰素（IFN）及干扰素刺激基因（ISGs）的转录调节。IRF家族成员包括哺乳类的9个成员,鸟类的10个成员以及硬骨鱼类的11个成员。IRF家族成员在抗病毒感染、参与先天性免疫和适应性免疫应答、调节细胞凋亡与分化等方面发挥重要生物学作用。其中,对于干扰素调节因子3（IRF3）与干扰素调节因子7（IRF7）的研究较为深入。近几年关于IRFs的研究表明,干扰素调节因子5（IRF5）能在RIG-I信号通路及Toll-like信号通路中发挥作用。对于哺乳类IRF5的研究主要集中在其参与调节自身免疫性疾病,鱼类中IRF5基因逐渐被克隆鉴定,鱼类IRF5的作用也渐渐被报道。但是对于硬骨鱼中IRF5功能的研究及其与干扰素调节因子家族之间的关系,相关研究报道甚少。因此,本文主要研究Ci IRF5对IFN的转录调控,以及Ci IRF5与Ci IRF3对IFN协同上调的调控机制,从而进一步验证Ci IRF5与Ci IRF3在鱼类抗病毒免疫反应的重要地位。首先,我们通过检测脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）感染诱导后,... 

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【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
第1章 前言
    1.1 干扰素
    1.2 干扰素调节因子家族(IRFs)
    1.3 干扰素调节因子
        1.3.1 IRF5 的生理功能
        1.3.2 IRF5 的信号转导
        1.3.3 鱼类IRF5 的研究进展
    1.4 研究目的与意义
第2章 材料与方法
    2.1 实验仪器与材料
        2.1.1 细胞株、菌种与质粒载体
        2.1.2 主要仪器与试剂
    2.2 相关软件
    2.3 引物表
    2.4 实验方法
        2.4.1 草鱼IRF5 开放阅读框的克隆
        2.4.2 IRF5和IRF3 表达载体的构建
        2.4.3 细胞培养
        2.4.4 LPS刺激后草鱼IRF5 在细胞中表达水平检测
        2.4.5 草鱼IRF5对IFN的转录调控分析
        2.4.6 草鱼IRF5与IRF3对IFN转录调控分析
        2.4.7 免疫共沉淀
        2.4.8 GST-pull down实验
        2.4.9 草鱼IRF5在CIK细胞中的分布
第3章 结果与分析
    3.1 草鱼IRF5 基因的定量表达分析
    3.2 草鱼IRF5 重组质粒的鉴定
    3.3 草鱼IRF5 上调IFN的转录
    3.4 草鱼IRF5与IRF3 协同上调IFN的转录
    3.5 草鱼IRF5与IRF3 免疫共沉淀
        3.5.1 真核表达载体的标签检测
        3.5.2 草鱼IRF5与IRF3 体内结合
    3.6 草鱼IRF5与IRF3的GST-pulldown
    3.7 LPS刺激草鱼IRF5 的核移位
    3.8 草鱼IRF5 分布在细胞质
第4章 讨论
第5章 主要结论与展望
    6.1 主要结论
    6.2 创新点
    6.3 展望
致谢
参考文献



本文编号：3669325