黍子过氧化物酶诱导结直肠癌细胞DNA损伤和坏死性凋亡
发布时间：2022-09-18 18:19
结直肠癌是全球第三大常见恶性肿瘤,近年来其发病率和死亡率在发展中国家不断增加。目前肿瘤治疗药物主要通过诱导细胞凋亡抑制肿瘤生长,大多数癌细胞由于细胞凋亡机制失调而具有耐药性。Necroptosis是一种Caspase非依赖性细胞死亡方式,主要通过RIPK1和RIPK3严格调控,并且由MLKL执行完成。细胞受到内源性和外源性因素影响时,可诱导细胞发生DNA损伤（DSBs）,而DNA的DSBs是最严重的一种损伤。细胞发生DSBs后会激活细胞周期检查点,协调修复DNA损伤,调节基因表达。DSBs损伤分子标记物γH2AX在Necroptosis过程中会招募线粒体中的AIF易位形成DNA降解复合物,DNA DSBs的产生对染色质的溶解具有重要作用。Necroptosis为癌症治疗提供了新策略。本实验室已从黍糠中提取出一种含血红素辅基的阳离子过氧化物酶（proso millet peroxidase,PmPOD）,并且发现PmPOD可以诱导HCT116和HT29细胞发生RIPK1和RIPK3依赖性Necroptosis。虽然其确切的分子机制仍不清楚,但最近研究发现PmPOD可通过体外水解机制切割D...
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 结直肠癌简介
1.2 坏死性凋亡
1.3 DNA损伤应答
1.3.1 ATM-CHK2信号通路
1.3.2 ATR-CHK1信号通路
1.4 黍子过氧化物酶
1.5 研究目的及意义
第二章 PmPOD通过胞饮作用进入细胞
2.1 引言
2.2 实验材料、试剂
2.3 实验方法
2.3.1 细胞培养
2.3.2 细胞活力检测
2.3.3 细胞形态学观察
2.3.4 流式细胞术检测
2.3.5 免疫荧光染色
2.4 实验结果
2.4.1 PmPOD对结直肠癌细胞形态的影响
2.4.2 PmPOD对结直肠癌细胞增殖的影响
2.4.3 PmPOD诱导HCT116和HT29细胞Necroptosis
2.4.4 PmPOD在结直肠癌细胞核中定位
2.4.5 细胞膜胆固醇降低抑制PmPOD诱导细胞增殖
2.4.6 细胞膜胆固醇降低对PmPOD定位的影响
2.5 讨论
第三章 PmPOD诱导细胞DNA损伤
3.1 引言
3.2 实验材料、试剂与仪器
3.3 实验方法
3.3.1 细胞周期检测
3.3.2 单细胞凝胶电泳实验
3.3.3 细胞核形态观察
3.3.4 免疫荧光染色
3.3.5 Western Blot检测
3.4 实验结果
3.4.1 PmPOD诱导HCT116和HT29细胞周期停滞于S期
3.4.2 PmPOD对细胞核形态的影响
3.4.3 PmPOD诱导结直肠癌细胞DSBs
3.4.4 PmPOD诱导DNA损伤发生在Necroprosis上游
3.4.5 PmPOD诱导结直肠癌细胞形成γH2AX
3.4.6 PmPOD诱导结直肠癌细胞γH2AX表达量上调
3.4.7 PmPOD诱导结直肠癌细胞形成p-ATM病灶
3.4.8 PmPOD诱导结肠癌细胞Lamin B1解聚
3.5 讨论
第四章 PmPOD诱导的DNA损伤和Necroptosis与p53表达有关
4.1 引言
4.2 实验材料、试剂
4.3 实验方法
4.3.1 单细胞凝胶电泳实验
4.3.2 MTT检测
4.3.3 siRNA p53干扰
4.3.4 pCMV3-TP53-myc质粒转染
4.3.5 Western Blot
4.4 实验结果
4.4.1 siRNA p53对细胞活力的影响
4.4.2.siRNA p53对PmPOD诱导细胞DSBs的影响
4.4.3.p53异位表达对细胞活力的影响
4.4.4.p53异位表达对PmPOD诱导DSBs的影响
4.5 讨论
小结与展望
参考文献
攻读硕士学位期间取得的研究成果
致谢
个人简况及联系方式
本文编号：3680181
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 结直肠癌简介
1.2 坏死性凋亡
1.3 DNA损伤应答
1.3.1 ATM-CHK2信号通路
1.3.2 ATR-CHK1信号通路
1.4 黍子过氧化物酶
1.5 研究目的及意义
第二章 PmPOD通过胞饮作用进入细胞
2.1 引言
2.2 实验材料、试剂
2.3 实验方法
2.3.1 细胞培养
2.3.2 细胞活力检测
2.3.3 细胞形态学观察
2.3.4 流式细胞术检测
2.3.5 免疫荧光染色
2.4 实验结果
2.4.1 PmPOD对结直肠癌细胞形态的影响
2.4.2 PmPOD对结直肠癌细胞增殖的影响
2.4.3 PmPOD诱导HCT116和HT29细胞Necroptosis
2.4.4 PmPOD在结直肠癌细胞核中定位
2.4.5 细胞膜胆固醇降低抑制PmPOD诱导细胞增殖
2.4.6 细胞膜胆固醇降低对PmPOD定位的影响
2.5 讨论
第三章 PmPOD诱导细胞DNA损伤
3.1 引言
3.2 实验材料、试剂与仪器
3.3 实验方法
3.3.1 细胞周期检测
3.3.2 单细胞凝胶电泳实验
3.3.3 细胞核形态观察
3.3.4 免疫荧光染色
3.3.5 Western Blot检测
3.4 实验结果
3.4.1 PmPOD诱导HCT116和HT29细胞周期停滞于S期
3.4.2 PmPOD对细胞核形态的影响
3.4.3 PmPOD诱导结直肠癌细胞DSBs
3.4.4 PmPOD诱导DNA损伤发生在Necroprosis上游
3.4.5 PmPOD诱导结直肠癌细胞形成γH2AX
3.4.6 PmPOD诱导结直肠癌细胞γH2AX表达量上调
3.4.7 PmPOD诱导结直肠癌细胞形成p-ATM病灶
3.4.8 PmPOD诱导结肠癌细胞Lamin B1解聚
3.5 讨论
第四章 PmPOD诱导的DNA损伤和Necroptosis与p53表达有关
4.1 引言
4.2 实验材料、试剂
4.3 实验方法
4.3.1 单细胞凝胶电泳实验
4.3.2 MTT检测
4.3.3 siRNA p53干扰
4.3.4 pCMV3-TP53-myc质粒转染
4.3.5 Western Blot
4.4 实验结果
4.4.1 siRNA p53对细胞活力的影响
4.4.2.siRNA p53对PmPOD诱导细胞DSBs的影响
4.4.3.p53异位表达对细胞活力的影响
4.4.4.p53异位表达对PmPOD诱导DSBs的影响
4.5 讨论
小结与展望
参考文献
攻读硕士学位期间取得的研究成果
致谢
个人简况及联系方式
本文编号：3680181
本文链接：https://www.wllwen.com/projectlw/swxlw/3680181.html
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