在乳腺癌细胞中构建CRISPR多基因编辑系统

发布时间：2023-02-09 20:13

　　CRISPR多基因编辑系统在动植物中已被广泛应用。为了在乳腺癌细胞中构建一套多基因编辑系统,利用内源性tRNA自剪切特点,将tRNA与小向导RNA(sgRNA)进行串联组合实现基因编辑,并在MCF7乳腺癌细胞中对KLF4、MYC、SOX2和OCT4 4个转录因子同时调控,在基因水平、蛋白表达以及功能改变3个层次验证该多基因编辑系统的功能性与可靠性。实验结果显示被调控的转录因子在细胞内的表达量提高2倍以上,侵袭能力明显增强,细胞的存活率提高50%,干细胞比例由2.57%提高到18.5%。同时,该系统在SUM149PT细胞系也被验证成功。综上,一套基于CRISPR的标准、精确、可复制、高效、可靠的多基因调控系统首次在乳腺癌细胞中构建成功。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 多基因串联质粒的构建
        1.2.2 细胞培养与转染
        1.2.3 实时定量qPCR
        1.2.4 Western Blot检测
        1.2.5 细胞迁移实验
        1.2.6 细胞增殖实验
        1.2.7 干细胞比例检测
2 结果与分析
    2.1 CRISPR-dCas9多基因编辑系统的构建
    2.2 qPCR与Western Blot结果分析
    2.3 MCF7细胞在基因编辑后增殖、迁移和干细胞比例的变化
3 讨论与结论



本文编号：3739181