探究Slc5a8在小鼠眼角膜上皮表达的时空分布

发布时间：2023-04-20 06:12

　　角膜缘干细胞(Limbal stem cells,LSCs)存在于角膜缘区域。在个体发育过程中,LSCs向心移行并分化为成熟角膜上皮细胞。据此,可以作为LSCs和成熟角膜上皮细胞的鉴定和定位的理论基础。小鼠是重要的模式动物之一,但关于小鼠角膜缘细胞基因差异性表达的研究尚未见相关报道。本课题结合分子生物学技术和高通量组学技术探究小鼠眼角膜不同区域的差异表达,加深人们对于小鼠眼角膜细胞基因差异性表达的认知。SLC5A8是钠偶联的单羧酸转运蛋白(也称为SMCT1)参与乳酸和短链脂肪酸的运载,这一运载体不仅可以在卵细胞中表达,在其他体细胞中也同样表达。我们推测在小鼠角膜也会表达。本研究利用HE染色、免疫组化染色进行小鼠眼角膜形态学观察,界定角膜缘区域。在此基础上,通过获取角膜缘组织并将角膜缘区域根据冠状面象限分为上(Superior,S)、下(Inferior,I)、鼻(Nasal,N)、颞(Temporal,T)四个组,以中央角膜区域和结膜区域作为对照组进行转录组测序(RNA-seq)。然后对测序结果进行差异分析、GO注释和KEGG通路分析。通过差异分析获得细胞基因差异性表达的概况,筛选出有...

【文章页数】：94 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
主要符号对照表
第1章 引言
    1.1 角膜与角膜缘
    1.2 角膜缘干细胞(LSCs)
        1.2.1 LSCs的功能
        1.2.2 LSCs的增殖与分化
        1.2.3 LSCs标志物研究进展
        1.2.4 LSCs的空间分布
    1.3 转录组测序技术在LSCs上的应用
    1.4 单分子RNA原位检测在LSCs上的应用
    1.5 Slc5a8 的研究进展
    1.6 本课题的来源和意义
第2章 小鼠角膜缘区域的界定
    2.1 实验材料、设备与试剂配方
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 实验材料
        2.1.3 实验仪器
        2.1.4 试剂配方
    2.2 实验方法
        2.2.1 显微镜下观察角膜组织形态
        2.2.2 石蜡切片的制作
        2.2.3 HE染色
        2.2.4 免疫组化
    2.3 实验结果及分析
        2.3.1 小鼠角膜的组织形态学观察
        2.3.2 小鼠角膜的HE染色
        2.3.3 小鼠眼球石蜡切片的免疫组化结果
    2.4 讨论与小结
第3章 小鼠角膜缘组织转录组测序及差异表达分析
    3.1 实验材料、设备与试剂配方
        3.1.1 实验动物
        3.1.2 实验材料
        3.1.3 实验仪器
        3.1.4 试剂配方
    3.2 实验方法
        3.2.1 RNA样本的制备
        3.2.2 文库构建及上机测序
        3.2.3 数据处理及生物信息学分析
        3.2.4 qRT-PCR验证
    3.3 实验结果与分析
        3.3.1 原始测序数据的质量控制
        3.3.2 样本重复相关性分析结果
        3.3.3 差异基因表达分析和聚类分析结果
        3.3.4 富集分析结果
        3.3.5 qRT-PCR验证结果
        3.3.6 筛选差异表达基因
    3.4 讨论与小结
第4章 差异基因Slc5a8 在小鼠眼角膜的时空分布探究
    4.1 实验材料、设备与试剂配方
        4.1.1 实验动物
        4.1.2 实验材料
        4.1.3 实验仪器
        4.1.4 试剂配方
    4.2 实验方法
        4.2.1 qRT-PCR
        4.2.2 单分子RNA原位检测
        4.2.3 Western Blotting
        4.2.4 免疫组化
    4.3 实验结果与分析
        4.3.1 Slc5a8 在转录水平的定量与定位检测
        4.3.2 SLC5A8 在蛋白水平的半定量与定位检测
    4.4 讨论与小结
总结与展望
参考文献
致谢
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果



本文编号：3795050