干酪乳杆菌yhaⅠ基因敲除菌株的构建及其耐药表型的分析

发布时间：2024-06-04 05:23

　　为了深入研究干酪乳杆菌Zhang在抗生素环境中适应性进化机制,构建yha I基因敲除体系,并对突变体的耐药表型进行研究。运用PCR技术分别扩增yha I基因的同源臂序列,构建带有内部缺失yha I基因的敲除载体。采用Cre/lox基因重组系统,筛选双交换子L.casei Zhang-G-1200-yha I::lox66-P32-cat-lox71,构建突变株L.casei Zhang-G-1200-Che yhaChe I,通过稀释法研究突变株的耐药表型。通过PCR和PCR产物经测序验证,yha I基因缺陷的菌株构建成功。耐药表型结果表明,突变株在庆大霉素浓度为8和16μg/m L时,浊度变为原始菌株的1/2;在庆大霉素浓度为16μg/m L时,活菌数变为原始菌株的7/10。成功构建干酪乳杆菌Zhang的基因敲除体系,为研究干酪乳杆菌Zhang的基因功能提供了技术平台。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料与仪器
    1.2 实验方法
        1.2.1 乳酸菌和大肠杆菌的培养条件
        1.2.2 目的基因同源臂扩增及敲除载体的构建
            1.2.2. 1 目的基因同源臂扩增
            1.2.2. 2 敲除载体pNZ5319-yha IUp-Down的构建和克隆
        1.2.3 乳酸菌感受态的制备和敲除载体的电转化
            1.2.3. 1 乳酸菌感受态的制备
            1.2.3. 2 敲除载体的电转化
        1.2.4 双交换子L.casei Zhang-G-1200-yha I::lox66-P32-cat-lox71的筛选
        1.2.5 突变株L.casei Zhang-G-1200-yha I的构建
        1.2.6 突变株L.casei Zhang-G-1200-yha I耐药表型分析
    1.3 数据处理
2 结果与分析
    2.1 敲除载体p NZ5319-yha I Up-Down的构建
    2.2 基因敲除载体的电转化
    2.3 突变株L.casei Zhang-G-1200-yha I的构建
    2.4 突变株L.casei Zhang-G-1200-yha I的耐药表型的分析
3 讨论与结论



本文编号：3988928