免疫受体蛋白Sw-5b诱导过敏性坏死反应的信号传导域及其作用机制研究

发布时间：2024-07-02 21:45

　　植物进化出了细胞表面的免疫受体蛋白(Pattern recognition receptor,PRR)和胞内免疫受体蛋白(Nucleotide-binding leucine-rich repeat receptor,NLR)来识别病原效应因子并进而启动先天免疫系统来抵御病原物的侵染。NLR类受体蛋白作为最大的一类抗性蛋白,其结构主要包括N端结构域、核酸结合结构域(Nucleotide-binding,NB)和富亮氨酸重复的结构域(Leucine-rich repeat,LRR),根据其N末端结构域不同大致分为N末端含有Toll-白细胞介素1受体(Toll/IL-1 receptor,TIR)结构域的TIR-NBS-LRR和N末端含有卷曲螺旋(Coiled-coil,CC)结构域的CC-NBS-LRR两大类型。NLR免疫受体蛋白识别病原物效应因子并迅速激活下游信号传导途径,引发寄主产生强烈的过敏性程序化坏死反应(Hypersensitive response-programmed cell death,HR-PCD)。虽然目前植物NLR蛋白激活和信号传导的分子细节尚未完全了解,但是针对...

【文章页数】：126 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1 植物天然免疫概述
        1.1 植物天然免疫系统
            1.1.1 PAMP触发的基础免疫反应(PTI)
            1.1.2 效应子触发的免疫反应(ETI)
        1.2 植物NLR蛋白对效应因子的识别与信号传递
            1.2.1 植物NLR对病原物效应因子的识别
            1.2.2 植物NLR蛋白的下游信号传导
        1.3 核苷酸结合和NLR寡聚化
            1.3.1 NLR蛋白的核苷酸结合
            1.3.2 NLR蛋白寡聚化
        1.4 辅助NLRs
        1.5 植物NLR亚细胞定位的多样化
        1.6 NLR蛋白介导的下游信号转导和防御激活
            1.6.1 NLR蛋白介导的下游免疫信号
            1.6.2 与效应因子触发的免疫反应(ETI)相关的细胞变化
    2 长线形病毒科(Closteroviridae)概述
        2.1 长线形病毒科病毒的生物学特性
        2.2 长线形病毒家族的基因重组
            2.2.1 长线形病毒属病毒的基因重组
            2.2.2 毛形病毒属病毒的基因重组
        2.3 莴苣褪绿病毒(Lettuce chlorosis virus)
    3 本研究的目的意义
第二章 免疫受体蛋白Sw-5b诱导过敏性坏死反应的信号传导域及其作用机制研究
    1 实验材料和方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 植物材料
            1.1.2 毒源
            1.1.3 番茄抗病基因Sw-5b
            1.1.4 引物
            1.1.5 菌株
        1.2 实验方法
            1.2.1 培养基配制
            1.2.2 感受态制备
            1.2.3 载体构建
            1.2.4 质粒电转农杆菌并浸润寄主植物
            1.2.5 Western Blot分析
            1.2.6 免疫共沉淀(Co-IP)
            1.2.7 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)
            1.2.8 观察植物细胞荧光表达
            1.2.9 氨基酸序列比对和同源建模
    2 结果与分析
        2.1 Sw-5b NB结构域单独足以诱导过敏性坏死反应
        2.2 NB介导的过敏性坏死反应依赖于SGT1
        2.3 NB结构域的N端和C端对诱导过敏性坏死反应都具有重要作用
        2.4 P-loop基序对NB触发的过敏性坏死反应的作用鉴定
        2.5 NB结构域的二聚体化对于其诱导细胞死亡是必需的
        2.6 NB结构域诱导的过敏性坏死反应需要NB的细胞质分布
        2.7 辅助蛋白NRCs参与NB介导的过敏性坏死反应过程
    3 讨论
第三章 中国莴苣褪绿病毒南京分离物的全长基因组测定和序列分析
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 植物材料
            1.1.2 毒源
        1.2 实验方法
            1.2.1 Trizol法提取植物RNA
            1.2.2 逆转录PCR(RT-PCR)
            1.2.3 测序
            1.2.4 RNA 3'Race
            1.2.5 RNA 5'Race
            1.2.6 序列组装、ORF预测、氨基酸序列比对和进化树分析
    2 结果与分析
        2.1 LCV-NJ基因组RNA1的全长序列测定与分析
        2.2 LCV-NJ基因组RNA2的全长序列测定与分析
        2.3 LCV-NJ的5'UTR和3'UTR分析
        2.4 LCV-NJ的系统进化分析
    3 讨论
第四章 全文总结
    1.1 全文总结
        1.1.1 免疫受体蛋白Sw-5b诱导过敏性坏死反应的信号传导域及其作用机制研究
        1.1.2 中国莴苣褪绿病毒南京分离物的全长基因组测定和序列分析
    1.2 本研究的创新点
参考文献
附录A 缩略词表
附录B 载体构建及引物信息
附录C 常用抗生素及试剂的配制方法
附录D 研究生期间学术论文发表情况
致谢



本文编号：4000058