人小涎腺上皮干/祖细胞成肝诱导的相关研究

发布时间：2024-06-27 21:48

　　目的1.体外对人小涎腺上皮干/祖细胞(hMSG-EpiPCs)进行成肝诱导,鉴定诱导获得细胞的表型和检测其是否具有成熟肝脏细胞相关功能。2.移植hMSG-EpiPCs给急性肝损伤模型小鼠,鉴定其对小鼠急性肝功能损伤的修复能力,评估移植细胞成活率及肝内转归。方法1.利用组织块贴壁法从人小涎腺组织中分离培养出上皮干/祖细胞,体外传代扩增培养。利用免疫荧光和流式细胞术鉴定其干细胞表型和特异性标记物。体外Matrigel构建三维培养环境下对hMSG-EpiPCs进行成肝诱导并设立空白对照组。利用免疫荧光及Real-time PCR检测诱导而来的细胞相关肝脏细胞表型表达,并通过PAS染色、ICG摄取和CYP450功能测定检测其相关成熟肝脏细胞功能。2.使用CM-Dil荧光标记hMSG-EpiPCs并观察标记后细胞生长情况。建立联合免疫缺陷(SCID/Beige)小鼠20%CC14腹腔注射急性肝损伤模型,随机分为两组:实验组移植hMSG-EpiPCs(n=12),对照组注射PBS(n=12),另取正常SCID小鼠作为空白对照组(n=3)。术后观察小鼠体重变化。并于移植后1天、3天、1周及2周分别取...

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1-1hMSCrEpiPCs原代及传代培养

ａ?ｈＭＳＧ－ＥｐｉＰＣｓ原代培养；ｂ?ｈＭＳＧ－ＥｐｉＰＣｓ传至Ｐ３获得形态均一细胞；ｈＭＳＧ－ＥｐｉＰＣｓ传至Ｐ２５出现衰老细胞??－ＨＩ?ｆｆ??０?？，?Ｋ４?Ｖ?０?Ｗ＊?？？，?＾?？?１０＊?？？，?ｗ４??￥ｍｉＡ?ｍｍ?ｔｔｔｒ－Ａ?ｒｒｍ＊?ｍ－ａ?ｍ??ｊ：....

图１－２?ｈＭＳＧ－ＥｐｉＰＣｓ流式细胞学检测结果??

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图1-4hE}SCr-EpiPC:体外成肝诱导

ｍｍａ—■??图１－３?ｈＭＳＧ－ＥｐｉＰＣｓ免疫荧光??红色及绿色示阳性染色，蓝色示ＤＡＰＩ染核，标尺见右下角??

图1-3hMSCrEpiPCs免疫荧光红色及绿色示阳性染色，蓝色示DAPI染核，标尺见右下角

■■■■??图１－４?ｈＭＳＧ－ＥｐｉＰＣｓ体外成肝诱导??诱导初期，细胞状态好，逐渐生长聚集成细胞球；后期随细胞诱导成熟，增殖能??力下降，出现坏死细胞碎片??

本文编号：3995975