藏绵羊子宫内膜炎主要致病菌多重PCR检测方法的建立与评价

发布时间：2022-10-08 16:34

　　子宫内膜炎是威胁藏绵羊健康的疾病之一,严重阻碍着藏绵羊养殖业的健康发展,其病因是病原微生物感染藏绵羊子宫,所引起的一种繁殖障碍性疾病,导致绵羊消瘦、体重降低,影响绵羊的繁殖性能。由于羊子宫内膜炎不出现全身性的发热、炎症、疼痛等临床症状,特别是隐性子宫内膜炎,易被饲养者忽视,也是藏绵羊淘汰率升高的主要原因,给绵羊养殖业造成严重的经济损失。本研究共采集600份青海牧区的藏绵羊子宫,对样品进行单一PCR检测并建立了多重PCR方法,随机挑取30份阳性进行病原菌的分离与鉴定试验。取得结果有以下几点:（1）通过培养标准菌株并提取基因组,筛选出特异性引物,建立了单一PCR方法,其特异性良好,灵敏性较高。运用单一PCR法检测的600份样品中,无乳链球菌感染比例占47.33%,大肠杆菌占34.83%,金黄色葡萄球菌占6.5%,大肠杆菌和无乳链球菌混合感染占24.67%,未检出沙门氏菌和化脓隐秘杆菌。（2）通过单一PCR法的反应条件及检测结果,以无乳链球菌cfb基因、大肠杆菌phoA基因和金黄色葡萄球菌nuc基因为靶基因,标准菌株的基因组为模板,建立了多重PCR法。选取单一PCR检测的阳性样品,运用多重P... 

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Summary
缩略语表
第一部分 文献综述
    1 藏绵羊的研究进展
        1.1 藏绵羊的来源与发展
        1.2 青海藏绵羊的类型与分布
        1.3 青海藏绵羊的生活习性
        1.4 青海藏绵羊围产期常见的疾病
    2 藏绵羊子宫内膜炎的研究
        2.1 子宫内膜炎的致病机理
        2.2 藏绵羊子宫内膜炎的分类
            2.2.1 急性子宫内膜炎
            2.2.2 慢性化脓性子宫内膜炎
            2.2.3 慢性卡他性子宫内膜炎
            2.2.4 隐性子宫内膜炎
        2.3 藏绵羊子宫内膜炎主要致病菌
            2.3.1 无乳链球菌
            2.3.2 大肠杆菌
            2.3.3 金黄色葡萄球菌
            2.3.4 化脓隐秘杆菌
            2.3.5 沙门氏菌
            2.3.6 其他的病原菌
        2.4 羊子宫内膜炎主要致病菌检测方法
            2.4.1 传统的细菌培养分离与鉴定法
            2.4.2 酶联免疫吸附剂测定法
            2.4.3 聚合酶链反应技术
            2.4.4 环介导等温扩增技术
            2.4.5 核酸探针技术
            2.4.6 基因芯片
        2.5 羊子宫内膜炎的治疗
            2.5.1 西药配合激素疗法
            2.5.2 生物学疗法
            2.5.3 中医疗法
            2.5.4 其他防控对策
    3 研究的目的与意义
第二部分 试验研究
    试验一 藏绵羊子宫内膜炎单一PCR的建立与应用
        1 试验材料与方法
            1.1 标准菌株
            1.2 实验试剂
            1.3 主要仪器
            1.4 试剂的配制
            1.5 试验样品
            1.6 标准菌株的培养
            1.7 基因组的提取
            1.8 引物的筛选与合成
            1.9 单一PCR检测的特异性试验
            1.10 单一PCR检测的灵敏性试验
                1.10.1 活菌计数法
                1.10.2 单一PCR灵敏的性检测
            1.11 单一PCR检测方法的应用
        2 结果
            2.1 PCR引物特异性检测
                2.1.1 金黄色葡萄球菌引物特异性检测
                2.1.2 化脓隐秘杆菌引物特异性检测
                2.1.3 沙门氏菌引物特异性检测
                2.1.4 无乳链球菌引物特异性检测
                2.1.5 大肠杆菌特异性结果
            2.2 单一PCR灵敏性试验
            2.3 单一PCR检测样品的结果
        3 讨论
        4 小结
    试验二 藏绵羊子宫内膜炎多重PCR的建立及应用
        1 材料与方法
            1.1 标准菌株
            1.2 实验试剂和仪器
            1.3 试验样品
        2 试验方法
            2.1 PCR反应条件及体系的建立
            2.2 多重PCR敏感度测定
            2.3 多重PCR检测方法的应用
        3 结果
            3.1 多重PCR反应体系的结果
            3.2 多重PCR灵敏性试验
            3.3 多重PCR法的应用
            3.4 多重PCR与单一PCR检测的符合率
        4 讨论
        5 小结
    试验三 藏绵羊子宫内膜炎主要病原菌的分离与鉴定
        1 试验材料与方法
            1.1 主要仪器
            1.2 主要试剂
            1.3 试剂的配置
            1.4 试验样品
            1.5 病原菌的分离培养
            1.6 病原菌的生化鉴定
        2 病原菌分离结果
            2.1 病原菌的分离和镜检结果
            2.2 病原菌菌株的分离结果
            2.3 病原菌的生化鉴定结果
        3 讨论
        4 小结
全文结论
参考文献
致谢
作者简介
在读期间发表论文和研究成果等
导师简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]一例雏鸭大肠杆菌与金黄色葡萄球菌混合感染的分离鉴定与耐药性研究[J]. 张晓梅,孙培明.  黑龙江畜牧兽医. 2020(07)
[2]应用基因芯片技术检测食源性腹泻致病大肠杆菌[J]. 刘莹.  食品安全质量检测学报. 2020(03)
[3]利用高密度基因芯片开展滩羊群体亲缘关系遗传分析[J]. 马丽娜,马青.  黑龙江畜牧兽医. 2020(03)
[4]芯片技术在畜禽育种中的应用研究进展[J]. 马丽娜,刘永进,王锦,赵正伟,马青.  中国畜牧兽医. 2020(01)
[5]分子生物学技术在食品微生物检验中的应用[J]. 张悦,王静怡.  现代食品. 2020(01)
[6]母羊子宫内膜炎的发生原因、临床症状及防治措施[J]. 马殿阁.  现代畜牧科技. 2020(01)
[7]奶牛子宫内膜炎的临床表现、诊断方法和中西医治疗措施[J]. 侯林彤,李兴华,李辉,谷长剑.  现代畜牧科技. 2020(01)
[8]LAMP技术在家禽腹泻性疾病检测中的应用[J]. 董雯雯,张世栋,王春玲,艾洪新,李新华,潘力,朱伟,李峰.  山东畜牧兽医. 2019(12)
[9]欧拉型藏羊母羊繁殖性能分析[J]. 后永贵.  中国畜禽种业. 2019(12)
[10]7例犬子宫蓄脓病例的病原菌分离鉴定[J]. 陈诗涵,魏润宇,李军朝,管飘萍,黄紫贝,王彦红,张信军,王海燕,刘文博.  中国动物检疫. 2019(12)

博士论文
[1]藏绵羊HMOX1和HMOX2基因克隆、表达及其与耐低氧适应关联性研究[D]. 何建文.甘肃农业大学 2019
[2]不同品种牛群子宫内膜炎流行病学调查及其SNP差异分析[D]. 牛晖.吉林大学 2016
[3]内蒙古地区奶牛临床型子宫内膜炎致病葡萄球菌超抗原基因分布、耐药性及分型研究[D]. 赵俊利.内蒙古农业大学 2014

硕士论文
[1]奶牛临床型子宫内膜炎主要致病菌的分离鉴定及多重PCR检测方法的建立[D]. 王宁宁.西北农林科技大学 2019
[2]貂源肺炎双球菌和金黄色葡萄球菌的毒力基因检测及其致病性研究[D]. 商园园.山东农业大学 2019
[3]基于SSR标记评估青海省家牦牛和藏绵羊遗传多样性及近交程度[D]. 王秀蓉.青海师范大学 2019
[4]发酵乳杆菌对LTA诱导的牛子宫内膜细胞炎性损伤干预作用的研究[D]. 王佳美.沈阳农业大学 2018
[5]发酵乳杆菌对LPS诱导的牛子宫内膜细胞炎性损伤调节作用的研究[D]. 李美琦.沈阳农业大学 2018
[6]高原牧区藏绵羊睾丸及山羊隐睾免疫相关调节因子的表达及分布初步研究[D]. 宋笑.甘肃农业大学 2018
[7]陇西县奶牛子宫内膜炎流行病学调查与主要致病菌分离鉴定和药敏试验[D]. 孟彦军.甘肃农业大学 2017
[8]致病性牛源大肠杆菌毒力基因分子流行病学调查和耐药突变选择窗的应用[D]. 宋美英.东北农业大学 2017
[9]金黄色葡萄球菌和大肠杆菌感染子宫的机制研究[D]. 杨黎明.南京农业大学 2017
[10]高寒草甸天然牧草和栽培草地燕麦对藏绵羊消化代谢的影响[D]. 李福厚.兰州大学 2017



本文编号：3688051