沙眼衣原体CT135蛋白的表达与抗体制备

发布时间：2021-05-14 00:19

　　目的:在原核表达系统中表达沙眼衣原体CT135蛋白,并制备抗体,建立CT135蛋白免疫检测方法。方法:将沙眼衣原体CT135基因（1083 bp）克隆入带有His标签的pET-32a（+）载体中,通过NdeⅠ/XhoⅠ双酶切构建CT135全长的重组质粒WT,CT135基因N端逐渐缩短的重组质粒MT1、MT2、MT3,以及CT135基因C端逐渐缩短的重组质粒MT4、MT5、MT6,在大肠杆菌BL21（DE3）中重组表达;用Ni2+-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白,然后腹腔注射5周龄BALB/c雌鼠制备抗血清。结果:Western印迹使用高灵敏的二抗通过红外扫描系统检测到所有质粒可表达重组蛋白,但考马斯亮蓝染色结果显示只有MT6可高表达重组蛋白。制备纯化了MT6重组蛋白,通过腹腔注射免疫法制备了小鼠抗MT6血清。结论:大肠杆菌表达系统中,沙眼衣原体CT135蛋白的N端片段（1～374 bp）可以获得高表达。小鼠抗MT6血清的制备为后期检测沙眼衣原体CT135蛋白的表达奠定了基础。 

【文章来源】：生物技术通讯. 2020,31(01)

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 引物设计与合成
    1.3 CT135全长重组质粒构建
    1.4 CT135基因截短重组质粒构建
    1.5 蛋白表达
        1.5.1 蛋白取样
        1.5.2 SDS-PAGE
        1.5.3 考马斯亮蓝染色和Western印迹
    1.6 抗体制备及检测
2 结果
    2.1 质粒构建
    2.2 蛋白表达
    2.3 多克隆抗体制备及检测
3 讨论



本文编号：3184905