TRPM8通道对Zmpste24 -/- 小鼠骨髓间充质干细胞增殖/凋亡的影响

发布时间：2021-05-12 12:05

　　Hutchinson—Gilford早老症（HGPS）是一种罕见的遗传性疾病,其临床特征为患者幼年时期即出现衰老症状并累及多种组织器官,包括皮肤、肌肉、骨骼以及心血管系统。HGPS伴发有老年人常见的并发症,并最终导致死亡,该疾病患儿的平均寿命约13.5岁。HGPS是由于LMNA基因的点突变干扰了A型核纤层蛋白前体（prelamin A）翻译后的加工过程,从而导致异常prelamin A在细胞核堆积的结果。Zmpste24是参与由prelamin A形成成熟的核纤层蛋白A（lamin A）过程所必须的酶。Zmpste24基因敲除小鼠具有典型的早老表现,是目前研究细胞衰老机制的首选模型。瞬时性受体电位通道（transient receptor potential,TRP）是参与调节胞内钙离子平衡的一种通道,广泛表达于哺乳动物的多种组织中,并参与调节例如细胞增殖、细胞凋亡、递质释放、细胞分化、基因转录等诸多重要的生理功能。研究发现由早老症患者的内皮细胞诱导的多能干细胞高表达TRPV2,最终导致细胞凋亡,与细胞衰老密切相关。但是TRP通道对骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesene... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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文献回顾
实验一 Zmpste24~(-/-)、WT小鼠BMMSCs的分离培养及干性检测
    1 实验材料
        1.1 实验试剂
        1.2 实验仪器
        1.3 实验动物
        1.4 统计分析
    2 实验方法
        2.1 BMMSCs的分离培养与纯化
        2.2 BMMSCs干细胞表面标志物鉴定
        2.3 BMMSCs克隆形成能力的检测（CFU-F）
    3 实验结果
        3.1 BMMSCs的分离培养与纯化
        3.2 BMMSCs干细胞表面标志物鉴定
        3.3 BMMSCs克隆形成能力的检测
    4 讨论
实验二 Zmpste24~(-/-)、WT小鼠BMMSCs增殖、凋亡能力以及细胞衰老情况的检测
    1 实验材料
        1.1 实验试剂
        1.2 实验仪器
        1.3 实验动物
        1.4 统计分析
    2 实验方法
        2.1 BMMSCs细胞增殖能力的检测
        2.2 BMMSCs凋亡水平检测
        2.3 SA-β-gal染色检测BMMSCs的衰老情况
        2.4 BMMSCs的细胞周期蛋白及衰老相关基因表达水平的检测
    3 实验结果
        3.1 BMMSCs增殖能力的检测
        3.2 BMMSCs凋亡水平检测
        3.3 BMMSCs的衰老情况检测
        3.4 BMMSCs的细胞周期蛋白及衰老相关基因表达水平的检测
    4 讨论
实验三 Zmpste24~(-/-)、WT小鼠BMMSCs的TRP通道表达情况及与增殖凋亡相关通道的筛选
    1 实验材料
        1.1 实验试剂
        1.2 实验仪器
        1.3 实验动物
        1.4 统计分析
    2 实验方法
        2.1 RT-PCR检测两种小鼠BMMSCs的TRP通道的表达
        2.2 影响BMMSCs细胞增殖、凋亡的TRP通道的筛选
        2.3 Western-Blot检测两种小鼠TRPM8通道的表达
    3 实验结果
        3.1 两种小鼠BMMSCs的TRP通道的表达检测
        3.2 抑制BMMSCs细胞增殖、促进凋亡后TRP通道的表达情况
        3.3 两种小鼠BMMSCs的TRPM8通道的表达
    4 讨论
实验四 抑制TRPM8通道后Zmpste24~(-/-)小鼠BMMSCs的细胞周期及氧化应激因子的变化研究
    1 实验材料
        1.1 实验试剂
        1.2 实验仪器
        1.3 实验动物
        1.4 统计分析
    2 实验方法
        2.1 两种小鼠BMMSCs氧化应激因子的表达检测
        2.2 抑制TRPM8通道后Zmpste24~(-/-)小鼠BMMSCs的细胞周期及氧化应激因子的变化
    3 实验结果
        3.1 两种小鼠BMMSCs氧化应激因子的检测
        3.2 抑制TRPM8通道后Zmpste24~(-/-)小鼠BMMSCs的细胞周期及氧化应激因子的变化
    4 讨论
小结
参考文献
附录
个人简历和研究成果
致谢



本文编号：3183383