重组人基质金属蛋白酶12的原核表达与纯化

发布时间：2021-06-16 06:53

　　目的:利用原核系统表达重组对人基质金属蛋白酶12（MMP-12）并纯化,获得高纯度的人MMP-12蛋白。方法:在MMP-12氨基酸序列的N端加入His标签和肠激酶位点序列,构建MMP-12融合蛋白的原核表达载体,通过表达和亲和纯化获得MMP-12融合蛋白,以肠激酶对融合蛋白进行酶切和二次纯化,获得高纯度的人MMP-12。结果:构建了pET-MMP-12表达载体,并在大肠杆菌中实现了稳定高效表达。重组融合蛋白MMP-12经亲和层析纯化后,相对分子质量为42×10³,纯度约95%。利用肠激酶对融合蛋白MMP-12进行酶切,酶切效率接近100%,通过二次纯化获得了MMP-12,相对分子质量为40.8×10³,纯度大于95%。结论:利用原核表达系统高效表达了MMP-12融合蛋白,通过亲和纯化和肠激酶酶切的方法可以获得高纯度的MMP-12,为后续抗体制备和配基筛选奠定了基础。 

【文章来源】：生物技术通讯. 2020,31(01)

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【部分图文】：

MMP-12表达菌株的表达筛选电泳分析

图1 MMP-12表达菌株的表达筛选电泳分析超声沉淀用1%的Triton X-100洗涤除去脂类物质，然后用6 mol/L尿素+PBS充分溶解，上清以缓慢速度流经镍离子螯合的亲和层析柱，再用PBS缓冲液缓慢平衡层析柱5个柱积，进行缓慢柱上复性。分别用150 mmol/L咪唑洗脱收集目的蛋白，150 mmol/L咪唑+6 mol/L尿素洗脱梯度未复性蛋白。12%SDS-PAGE结果显示（图3），经过柱上复性后，MMP-12包涵体复性率将近50%，亲和纯化后，复性后的MMP-12融合蛋白纯度在95%以上。

纯化后MMP-12蛋白的HPLC纯度测定图

【参考文献】：
期刊论文
[1]非小细胞肺癌组织中MMP-12的表达及临床意义[J]. 潘虹,刘铭,张晓莉,张雪,黄君富,王珏,刘春江,帅维正,张可珺,府伟灵.  第三军医大学学报. 2010(02)



本文编号：3232595