脑组织外泌体提

发布时间：2021-06-16 06:52

　　目的探讨脑组织外泌体提取、鉴定及脑室注射活体示踪方法。方法采用蔗糖梯度离心法,多次离心去除杂质,最终得到纯度较高的脑组织外泌体,采用电镜及western-blot技术对不同密度蔗糖溶液内的外泌体进行鉴定,DiR （1,1’-dioctadecyltetramethyl indotricarbocyanine Iodide）染料标记后在近红外二区仪器下观察脑室注射外泌体后在体内的远程转移情况。结果应用蔗糖梯度离心法进行超高速离心可得到背景较为干净的脑组织外泌体,DiR染料可对外泌体进行标记并显示外泌体在体内转移途径。结论应用蔗糖梯度离心法可成功提取脑组织中外泌体,DiR染料可对外泌体标记并进行活体示踪。 

【文章来源】：卒中与神经疾病. 2020,27(01)

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【部分图文】：

电镜下观察各层溶液中外泌体

图1 电镜下观察各层溶液中外泌体在使用蔗糖梯度离心提取组织外泌体之前人们对小鼠、猕猴或人类的组织使用过滤、涡旋震荡、均质化等方法[25-26],但是均存在提取纯度过低、背景杂质较多等问题;再者,脑组织结构复杂,包括各种神经细胞及纤维结缔组织,既往方法未能充分对脑组织中各个成分进行解离,从而造成脑组织提取外泌体浓度过低甚至无法得到外泌体。本实验采用3型胶原酶充分解离组织、三重蔗糖垫、密度梯度离心方法,分离脑组织外泌体,在溶液F1、F2、F3、F4各层中均可见外泌体分布,电镜下呈典型杯状囊性结构,直径为50～150 nm,Western-blot检测各层均有外泌体标记蛋白Alix、Hsp70、Flotillin-1表达,证实成功分离脑组织外泌体,相对于传统方法,本方法可从脑组织中稳定提取外泌体,并保证外泌体形态完整,为进一步对脑组织外泌体所携带miRNA及蛋白研究奠定坚实的基础。然而,目前的分离及标记方法尚不能分离外泌体或亚群,对于其功能的分析更加困难,本研究描述的方法也未分离出单独的外泌体群[27]。相比于其他分外泌体分离方法,蔗糖梯度离心法可对样本进行大批量分离,并且不被化学试剂污染,但是样本处理耗时较长,设备相对昂贵,再者超高速离心可能在一定程度上破坏外泌体结构,从而影响相应的功能。外泌体领域的研究仍需进一步深入。细胞培养并检测细胞分泌的外泌体可以作为更好的选择,但是一种细胞同样可分泌多种外泌体,对于外泌体的研究仍然任重而道远。

外泌体因其独特的结构以及穿越血脑屏障的功能在生物标记物、药物载体、神经血管重塑及治疗方面具有极大的潜能。但是现在依然存在多种问题:外泌体内各种生物活性分子间的相互作用机制未完全阐明;上述提到的RNA的研究多局限于miRNA,其他特异性RNA发现较少。外泌体对于疾病的诊断及预后等方面需要进一步去研究。


本文编号：3232593