VZV糖蛋白E基因胞外域的克

发布时间：2021-07-20 03:15

　　目的:分别用原核和真核细胞稳定表达水痘-带状疱疹病毒（Varicella-zoster virus,VZV）糖蛋白E（glycoprotein E,g E）的基因胞外域,对融合蛋白进行特异性鉴定和免疫反应性分析,将这两种融合蛋白分别免疫新西兰家兔,制备兔抗VZV g E多克隆抗体;应用融合蛋白作为抗原建立检测VZV特异性抗体的血清学试验,开展对VZV感染的流行病学调查,以评价VZV疫苗的免疫效果,为易感人群VZV感染的诊断和治疗以及水痘预防措施的制定提供重要的实验依据,并为研制安全性更高的VZV g E亚单位疫苗奠定基础。方法:从临床采集带状疱疹患者的皮肤囊泡液接种至单层人胚胎成纤维细胞（human embryo fibroblast,HF）,进行病毒分离;对分离的病毒株进行特征性细胞病变效应（Cytopathic effect,CPE）,间接免疫荧光和DNA测序鉴定。将确认的VZV临床分离株体外培养,PCR扩增VZV g E基因胞外域片段,分别构建原核表达质粒g E-p ET-32a（+）和真核表达质粒g E-p CDNA3.1/myc-His（-）,测序后将原核质粒转化至E.col... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

HZ患者皮肤囊泡液接种至HF细胞后出现CPE结果(×200).A：正常HF细胞；B：VZV感

安徽医科大学硕士学位论文原核重组质粒 gE-pET-32a(+)和真核重组质粒 gE-pCDNA3.1/myc-His(-鉴定PCR 扩增的 gE 基因的产物和重组质粒 gE-pET-32a(+)被双酶切后的产物凝胶电泳，均可见 1617 bp 的目的条带。图 3、4。该产物经 DNA 测序后T 法与 GenBank 数据库比对，其序列与 VZV Dumas 标准株基因组 DNA 的应序列符合率为 100%。图 5。

重组质粒 gE-pCDNA3.1/myc-His(-)的构建与酶切鉴定. A：gE 基因胞外域重组质粒单、双酶切鉴定。 M：Marker；1: 目的基因片段；2: 以 ddH2O照；3: 重组质粒；4: 重组质粒经 Xhol I 酶切；5: 重组质粒经 HandIII 酶双酶切。e construction of the gE-pCDNA3.1/myc-His(-) plasmid. A: PCR amplificalar domain; B: Identification of recombinant plasmid with restriction enzymerker; 1:gE extracellular domain gene product; 2: PCR negative cA3.1/myc-His(-) plasmid; 4: Xhol I enzyme digestion; 5: HandIII enzymeand HandIII double enzyme digestion.

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3292008