重组HSV-SOCS4病毒对小鼠细胞因子风暴所致免疫病理改变的研究
发布时间：2021-09-03 14:23
溶瘤病毒是一类具有复制能力,经改造后可靶向杀死肿瘤细胞的病毒,对肿瘤具有特殊趋向性,因此溶瘤病毒疗法是近些年治疗肿瘤疾病的研究热点。由于单纯疱疹Ⅰ型（Herpes simplex virus 1,HSV-1）在人群中带菌率高,病毒毒力较小,易于构建重组病毒等优势,因此HSV-1是目前溶瘤病毒研究的热点之一。由HSV-1改造而成的溶瘤单纯疱疹病毒（oHSV）亦是FDA首次批准的溶瘤病毒,应用于晚期黑色素瘤的治疗,并将此溶瘤病毒药物命名为talimogene laherparepvec（T-Vec,Imlygic,安进公司）[1]。当oHSV用于治疗肿瘤患者过程中,宿主对于其所引起的反应是复杂多样的,其中细胞因子风暴则是最为严重的不良反应之一。一旦细胞因子风暴发生,肿瘤患者由于自身内环境紊乱及免疫功能低下,可导致更为严重的免疫病理损伤。细胞因子信号抑制蛋白（Suppressors of cytokine signaling,SOCS）家族是一类细胞因子信号通路抑制蛋白,是JAK-STAT信号通路的主要负调控蛋白。SOCS蛋白与病毒感染以及器官损伤具有密切的联系,其中,...
【文章来源】：广州医科大学广东省
【文章页数】：88 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组质粒pKO-SOCS4酶切位点示意图
pKO-SOCS4载体结构图
经 1.0%琼脂糖凝胶电泳显示在Maker 1000~2000 之上有一条带，与 SOCS4 理论值1397bp相符（图1-3）。图 1-3：EX-T3502-M02-5 的 SOCS4 基因 PCR 扩增产物（1.0%琼脂糖凝胶电泳）Fig 1-3 PCR amplification of SOCS4 from EX-T3502-M02-52、BAC-SOCS4 表达质粒的构建2.1 将回收的扩增产物及原核表达载体 T-easy 进行连接反应，构建 T-SOCS4 重组质粒。2.2 原核表达载体 T-SOCS4 以及 pNEWUL 分别用 AccI 和 NotI 进行双酶切，酶切产物纯化后用 T4DNA 连接酶进行连接反应，构建 p-SOCS4 重组质粒。2.3 原核表达载体 p-SOCS4 以及 Pko5.1 分别用 BglⅡ和 PacI 进行双酶切，酶切产物纯化后用 T4DNA 连接酶进行连接反应，构建 Pko-SOCS4 重组质粒。2.4 以 UL3、UL4 作为 SOCS4 基因两端的同源臂，以同源重组的方式将 SOCS4基因重组进 BAC-HSV-1 质粒中。图 2-4 所示，重组质粒经 PCR 鉴定
本文编号：3381278
【文章来源】：广州医科大学广东省
【文章页数】：88 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
重组质粒pKO-SOCS4酶切位点示意图
pKO-SOCS4载体结构图
经 1.0%琼脂糖凝胶电泳显示在Maker 1000~2000 之上有一条带，与 SOCS4 理论值1397bp相符（图1-3）。图 1-3：EX-T3502-M02-5 的 SOCS4 基因 PCR 扩增产物（1.0%琼脂糖凝胶电泳）Fig 1-3 PCR amplification of SOCS4 from EX-T3502-M02-52、BAC-SOCS4 表达质粒的构建2.1 将回收的扩增产物及原核表达载体 T-easy 进行连接反应，构建 T-SOCS4 重组质粒。2.2 原核表达载体 T-SOCS4 以及 pNEWUL 分别用 AccI 和 NotI 进行双酶切，酶切产物纯化后用 T4DNA 连接酶进行连接反应，构建 p-SOCS4 重组质粒。2.3 原核表达载体 p-SOCS4 以及 Pko5.1 分别用 BglⅡ和 PacI 进行双酶切，酶切产物纯化后用 T4DNA 连接酶进行连接反应，构建 Pko-SOCS4 重组质粒。2.4 以 UL3、UL4 作为 SOCS4 基因两端的同源臂，以同源重组的方式将 SOCS4基因重组进 BAC-HSV-1 质粒中。图 2-4 所示，重组质粒经 PCR 鉴定
本文编号：3381278
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