建立大鼠脊柱功能单位体外培养模型

发布时间：2021-10-18 19:37

　　目的建立大鼠脊柱功能单位（functional spine unit, FSU）体外培养体系模型。方法选取8～12月龄雄性大鼠,用CO₂安乐处死后,解剖大鼠脊柱胸椎和腰椎。保留一侧椎体骨质2 mm,另外一端紧贴椎间盘终板外缘切除,制作骨-椎间盘-骨结构FSU。将FSU用1%PBS清洗后,放入12孔板中并加入培养基连续培养28 d。在不同的时间节点（0、3、5、7、14、21、28 d）用MTT和DAPI（4′,6-diamidino-2-phenylindole）染色并冰冻切片分别检测椎间盘纤维环和髓核的细胞活性。提取不同时间点椎间盘髓核组织检测糖胺聚糖（glycosaminoglycan content, GAG）的差异性并做定量评估。Western blot检测不同时间点椎间盘组织聚糖蛋白聚糖降解碎片（aggrecan fragment）中衰老标志基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases, MMPs）及血小板反应蛋白解整合素金属肽酶（a disintegrin and metalloproteinase with thrombospo... 

【文章来源】：广东医学. 2019,40(21)

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试剂与仪器
    1.2 实验动物
    1.3 建立FSU模型
    1.4 MTT染色及DAPI免疫荧光染色
    1.5 糖胺聚糖检测(glycosaminoglycan content,GAG)
    1.6 蛋白印痕检测(Western blot analysis)
    1.7 RT-qPCR检测aggrecan及CollagenⅠ基因表达
    1.8 统计学方法
2 结果
    2.1 FSU连续体外培养28 d细胞活性改变
    2.2 FSU连续体外培养7 d髓核内GAG含量的改变
    2.3 FSU连续体外培养7 d椎间盘组织aggrecan fragment中金属蛋白酶的表达差异
    2.4 FSU连续体外培养7 d椎间盘组织mRNA中衰老基因表达差异
3 讨论



本文编号：3443380