BR3胞外区保守结构域附近刚性区域分析

发布时间：2023-04-29 22:26

　　目的:分析BR3胞外区保守结构域附近刚性区域在BR3结合BAFF过程中的作用。方法:将BR3胞外区分成包含Dx L结构域的BR3-1和其C端相邻的BR3-2,构建BR3-1-Fc和BR3-2-Fc重组质粒。将正确的BR3-1-Fc和BR3-2-Fc重组子转入大肠杆菌BL21中,诱导表达,并用蛋白A凝胶亲和层析柱纯化获得相应蛋白。ELISA检测其结合BAFF,BR3-1/2小肽对BR3-1-Fc与BAFF结合活性的影响。结果:表达纯化出纯度高达90%的BR3-1-Fc和BR3-2-Fc融合蛋白。融合蛋白可与BAFF结合,且具有剂量依赖性。BR3-2小肽在高浓度条件下对BR3-1-Fc与BAFF的结合起促进作用,300μg/ml时,促进作用达20%。结论:BR3受体胞外区保守Dx L结构域相邻的BR3-2刚性结构区域也可与BAFF结合,在BR3与BAFF的高亲和性能中起作用,为进一步设计高亲和性能BAFF拮抗肽奠定了理论基础。

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 实验试剂
        1.1.2 实验材料
    1.2 方法
        1.2.1 BR3-1和BR3-2的设计
        1.2.2 p ET30a-BR3-1-Fc和p ET30a-BR3-2-Fc融合质粒构建
        1.2.3 融合蛋白的诱导表达和纯化
        1.2.4 ELISA融合蛋白结合的活性分析和小肽竞争
    1.3 统计学分析
2 结果
    2.1 重组质粒的构建
    2.2 BR3-1-Fc和BR3-2-Fc融合蛋白的表达纯化
    2.3 BR3-1-Fc和BR3-2-Fc融合蛋白结合BAFF的生物学活性
    2.4 肽抑制/增加BR3-1-Fc和BAFF的相互作用
3 讨论



本文编号：3805862