基因工程小肽——[Gly～（14）]-Humanin及人胰岛素突变体原核表达克隆的构建、表达及初步纯化

发布时间：2023-04-29 23:59

　　目的 1．基因工程[Gly¹¹]-Humanin原核表达体系的构建、表达及初步纯化 2．基因工程人胰岛素突变体原核表达体系的构建、表达、初步纯化及测活 方法 采用基因工程手段，基因合成法分别获得[Gly¹¹]-Humanin(HNG)及人胰岛素突变体(M-insulin)的cDNA序列，构建了pBV220-HNG、pTXB1-HNG及pTXB1—M-insulin原核表达质粒，基因测序确定质粒的正确性。 三个质粒转化大肠杆菌工程菌株，诱导表达，Western-Blot鉴定目的蛋白。 采用超声加洗涤液破碎菌体；离心加冻融分离纯化融合蛋白，研究不同的超声次数和冻融对包涵体洗涤效果的影响。 放免法测定人胰岛素突变体融合蛋白的活性。 结果 1．克隆构建 成功构建了pBV220—HNG、pTXB1—HNG及pTXB1—M-insulin三个质粒，基因测序显示重组质粒的大小、方向、长度均正确。pBV220—HNG在大肠杆菌中未检测到表达，后两个克隆在大肠杆菌BL21(DE3)...

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【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
第一部分 [Gly¹⁴]-Humanin原核表达克隆的构建、表达及初步纯化
    引言
    一、 [Gly¹⁴]-Humanin基因序列的设计
    二、 [Gly¹⁴]-Humanin原核表达克隆的构建(单拷贝表达方式)
    三、 [Gly¹⁴]-Humanin原核表达载体的构建、表达及纯化(融合表达)
第二部分 人胰岛素突变体原核表达克隆的构建、表达、纯化及活性测定
    引言
    一、 人胰岛素突变体基因序列的设计
    二、 人胰岛素突变体原核表达克隆的构建、表达、纯化及活性测定(融合蛋白表达方式)
第三部分 结论
参考文献
综述
参考文献
致谢



本文编号：3806005