体外研究脊髓灰质炎病毒Ⅰ型疫苗株结构蛋白对人呼吸道上皮细胞内天然免疫反应系统的作用及其免疫学意义

发布时间：2024-05-13 01:39

　　尽管针对脊髓灰质炎病毒已经有长达数百年的研究并成功研制出了预防性疫苗,但是对于该病毒如何启动机体天然免疫反应,进而激活获得性免疫反应这一过程的具体分子机理仍有诸多空白。本研究通过体外分析脊髓灰质炎病毒Sabin减毒株Ⅰ型的结构蛋白对人呼吸道上皮细胞内天然免疫反应信号分子的影响,了解脊髓灰质炎病毒在上皮细胞中启动免疫信号的具体分子机制。采用PCR方法扩增脊髓灰质炎病毒四种结构蛋白VP1、VP2、VP3和VP4,经酶切纯化后与pcDNA3.1+真核表达载体连接,分别构建含目的基因的四种重组质粒。将重组质粒分别转染至人呼吸道上皮细胞16HBE中,48h后收集培养上清、细胞。提取细胞的总RNA,利用Q-PCR法分别检测四种结构蛋白表达所诱导的天然免疫信号分子的mRNA表达量。同时,上清、细胞裂解物分别与人T细胞共培养,检测其对T细胞增殖的影响。体外在16HBE细胞中分别表达SabinⅠ病毒VP1～VP4四种结构蛋白均可刺激如LTα3、NIK等NF-κB天然免疫信号通路相关分子的表达,并且表达这四种蛋白的细胞裂解物与T细胞共培养后均表现出刺激T细胞非特异性增殖的效应。但是,仅有VP1、VP2表达...

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【文章目录】：
材料与方法
    1细胞及毒株
    2主要试剂
    3细胞培养
    4真核表达载体构建
    5细胞转染
    6结构蛋白的表达检测
    7结构蛋白表达后的样本收集
    8实时定量PCR
    9 ELISPOT分析
    10统计分析
结果
    1含有PV结构蛋白VP1、VP2、VP3和VP4的4个真核表达载体的构建及鉴定
    2PV四种结构蛋白在16HBE细胞中表达对NF-κB信号通路的相关免疫反应分子表达的影响
    3PV四种结构蛋白在16HBE细胞中表达对人类初始T细胞的非特异性刺激效应
讨论



本文编号：3972188